将B细胞重编程为功能性T淋巴细胞研究（三）
重编程的机制研究：Hoxb5将B细胞转化为ETP
那么，B细胞重编程为T细胞过程中Hoxb5是从哪开始起作用的呢？
研究人员进一步探索重编程中否将pro-pre-B细胞直接重编程为ETP（iETP， early T cell progenitors ）。他们分析了retro-Hoxb5小鼠中BM和胸腺中Lin-CD44+c-kithiCD25- iETP [图9a]的细胞学动态学。结果显示，在移植后第2周至第6周，在retro-Hoxb5小鼠的BM中检测到GFP+iETP [图9b] ，移植后约3周达到最大丰度。 BM-ETP在转录组学水平显示还残留Pro-pre-B细胞的部分基因表达特征[图9c] 。在胸腺中移植后第4周检测到最大丰度[图9b]，转录组水平显示已经完全关闭Pro-pre-B特异表达基因（如Pax5, EBF1, CD19） [图9c] 。
为了验证胸腺中iETP能够分化为成熟T细胞，研究人员分离了iETP，进行了胸腺内二次移植实验。结果显示ETP可以在受体鼠胸腺发育成熟为CD4+ SP和CD8+ SP T细胞，并且成功分布到脾脏，淋巴结和外周血[图9d] 。因此，Hoxb5是在骨髓中将B细胞重编程为 T淋巴祖细胞（重编程中间态细胞），之后在胸腺中完成重编程，产生有功能的T淋巴祖细胞，再发育产生成熟T细胞。
Hoxb5靶向B、T细胞调节因子和染色质修饰因子
最后，研究人员还通过RNA-Seq和CHIP-Seq实验对比分析了表达Hoxb5和表达GFP对照的Pro-pre-B细胞的转录组和表观组学特征。Hoxb5在pro-pre-B细胞中的表达改变了许多与染色质修饰相关的基因的表达，包括表观遗传修饰因子Hdac9，Ezh1，Ldb1，Cbx8和Asxl1 [图10a]，与B到T细胞重编程过程基因表达模式的改变一致。重要的是，早期B细胞发育所必需的转录因子，如Ebf1，Bcl11a，Foxp1和Foxo1 被Hoxb5抑制，而对T细胞发育或功能至关重要的Nfatc1，Tcf12， Lmo2和Prdm1在pro-pre-B细胞中被Hoxb5激活[图10b] 。
GSEA（Gene set enrichment analysis ）分析表明，与感染空载体相比，retro-Hoxb5 pro-pre-B细胞中对B细胞发育必需的Ikzf1（Ikaros）和Pax5被显着抑制[图10c、d]，而且遗传修饰因子Kmt2a（Mll）（一种对HSC自我更新重要的组蛋白甲基转移酶）也被显著抑制[图10e] 。
这些结果表明，pro-pre-B细胞中Hoxb5的表达抑制B细胞谱系特异性转录因子和特征基因的表达，增强与T细胞发育相关的转录因子和基因的表达，从而实现诱导B细胞到T细胞的命运转化。
好了，总之研究人员揭示了转录因子Hoxb5的表达能够在体内将Pro-pre-B细胞重编程为有生理功能的T细胞。Hoxb5通过抑制B细胞关键转录因子、激活T细胞相关转录因子、调控表观遗传相关分子，从而实现B细胞到T细胞的命运改变。
这时候，仿佛又听到Hoxb5在傲娇的说：单单靠我一个转录因子，在B细胞中维持短短2周的表达，就可以抑制一堆B细胞特异的基因，促进一堆T细胞特异的基因，直接把B细胞变成了T细胞了，而且是记忆力很好的T细胞，有获得性免疫记忆功能哦！我腻不腻害？
故事终于讲完了~~~小编要喝口水~~~接着广告时间到！！！！
大家还记得故事里用到的很重要的工具小鼠吗？ Hoxb5LSL/+ 小鼠（条件性过表达），Tet-on Hoxb5-BFP小鼠（诱导型条件性过表达），他们都是由百奥赛图构建的哦，如果您有基因编辑模式动物的需求欢迎联系我们^_^
参考文献
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