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Bio-Rad发布QX ONE ddPCR 数字PCR一体机问世

2020.3.26

聚合酶链式反应 ( polymerase chain reaction，PCR) 提出至今已有20年时间，期间PCR已发展成为分子生物学领域的一项关键技术和常规技术，极大地推动了生命科学各个领域的发展。PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。

QX ONE ddPCR系统

90 年代后期，美国 ABI 公司推出的实时荧光定量PCR( real time PCR，qPCR) 技术及相关产品更是将PCR由体外合成及定性/半定量检测技术发展成为一种高灵敏、高特异性和精确定量的基因分析技术。20 世纪末，美国约翰·霍普金斯大学Ludwig中心联合主任Kenneth Kinzler与同事Bert Vogelstein一起首先提出了“数字PCR”(digital PCR，dPCR) 的概念，将分析带入了绝对定量时代。

如今，ddPCR技术已经应用在多个方面，包括定量癌症标志物、测定病毒载量、区分基因组变异、验证新一代测序的结果、基因表达分析、转基因检测以及环境监测等等。此外，您还可以利用ddPCR技术来检验CRISPR/Cas9的基因组编辑效果。

目前市场主流的是三家：

1、赛默飞世儿的3D数字PCR（芯片式数字PCR）：主要是将20ul反应体系分散到20,000个微孔中进行反应，变成20,000个反应体系，PCR反应结束后，采用CCD拍照，数阳性反应孔。

2、Bio-Rad的微滴数字PCR（油包水原理）：将20ul反应体系采用液滴反应器形成20,000个油包水反应体系，PCR反应结束后，才有流式细胞术的原理，检测每一个液体，数阳性反应的液滴数量。

3、RainDance 的数字PCR（油包水原理）：原理与伯乐微滴数字PCR相同，但是其液体形成能力比伯乐强很多，理论上可以产生1,000万个小油滴。

相对于荧光定量PCR(qPCR)而言，dPCR具备以下优势：

无需依赖参考物或标准品
通过使用更多PCR复制物能够提高精确度
对抑制剂具有较高耐受性
能够分析复杂混合物
对较小倍数改变的线性检测

实时荧光定量 PCR、传统 PCR 与数字 PCR 概述

图片来自赛默飞官网

目前Bio-Rad推出了全新的QX ONE ddPCR 系统，将ddPCR工作流程无缝整合成一体化设备，使其成为实验室中优化流程、扩大生产和发展业务的理想伙伴。此次即将推出的QX ONE系统将Bio-Rad的微滴式数字PCR（ddPCR）技术集成在单台自动化仪器中，适用于药物开发和生产质控，以及其他关键的检测环境。

高通量全自动ddPCR检验应用方案

QX ONE ddPCR系统整合了微滴生成、热循环反应及微滴读取等步骤，最大程度减少人工操作，提高了实验通量。配备四个独立的荧光检测通道，结合ddPCR特有的高阶多重PCR技术，可以在单反应孔中实现8重拷贝数变异（CNV）检测、5重突变检测或4重基因表达检测。兼容目前QX200 系统中所使用的supermix、assay和kit。

QX ONE ddPCR系统实验流程