放射免疫分析的同位素标记介绍
标记物
标记物是指通过直接或间接的化学反应将放射性核素连接到被标记分子上所形成的化合物。制备高比度、高纯度和具完整免疫活性的标记物是建立高质量放射免疫分析法的重要条件。在放射免疫技术中,常用的放射性核素有放射γ射线和β射线两大类。前者主要为 125I、131I、57Cr 和 60Co;后者为3H、14C 和32P。其中使用最广泛的是125I,其优点为:
①125I 的化学性质较活泼,制备标记物的方法简便;
②125I 衰变时产生的γ射线,对标记多肽、蛋白质抗原分子的免疫活性影响小;
③γ射线测量简便;
④125I 的半衰期(60天)、核素丰度(>95%)及计数更适用。而3H 和14C 在衰变时产生的β射线虽易防护,标记物的有效期长;
但核素衰变半衰期长,制备标记物和β射线测定需用的设备条件复杂,不易在一般实验室进行。
被标记的化合物一般要求其纯度应大于90%,且具完整的免疫活性,以避免影响标记物应用时的特异性和测定灵敏度;此外,对于需在化合物分子中连接前述反应基团时,应注意引入的分子结构不能掩盖抗原-抗体决定簇。
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