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琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪载体概述

2019.12.20

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪用于分离、鉴定和纯化DNA段,是分子克隆的核心技术之一。该技术操作简单,迅速,能分离用其它方法如密度梯度离心等不能满意分离的DNA段。此外,凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭直接观察到,甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外线激发下也能直接检测到。这些分离的DNA条带可以从凝胶中回收,用于各种各样的目的。

 琼脂糖凝胶的分离范围很大,50bp至百万bp长的DNA都可以在不同浓度和构型的琼脂糖凝胶中电泳分离。小片段DNA5020000bp)zui适合在恒定强度和方向的电场中水平方位的琼脂糖凝胶中电泳分离。在这些条件下,DNA的泳动速度通常随DNA段长度的增加而减少,与电场强度成正比。但此相关性当DNA段长度超过最大极限值时会立即被破坏,这主要是由于凝胶的构成和电场强度决定的。当线状双螺旋DNA的半径超过凝胶的孔径时,就达到分辨率的极限。此时,DNA不再被凝胶按其大小筛分,而必须以一端在前的方式在凝胶中迁移,象通过曲折而又空间有限的管子。这种迁移模式称作蠕行。

聚丙烯酰胺凝胶最适合分离小片段DNA5500bp),分辨率非常强,长度上相差1bp或质量上相差0.1%DNA都可以彼此分离。虽然它能很快地进行电泳,并能容纳较大的DNA上样量,但与琼脂糖凝胶相比,在制备和操作上更繁琐。聚丙烯酰胺凝胶电泳是在恒定电场中垂直方位上进行的。


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