抑郁模型大鼠不同部位 miR－16表达及其与 5－羟色胺转...1
抑郁模型大鼠不同部位 miR－16表达及其与 5－羟色胺转运体的关联性研究
摘 要 目的 研究 miＲ － 16 在慢性不可预知温和应激抑郁症模型大鼠神经系统不同部位的表达及其与 5 － 羟色胺( 5 －HT) 转运体的关联性。方法 对照组和慢性不可预知温和应激抑郁模型组大鼠各 10 只，模型组大鼠接受 21 天的不可预知温和应激刺激，对照组大鼠正常饲养。两组大鼠麻醉后收集脑脊液，测定 miＲ － 16。然后断头处死，分离前额叶皮质、中缝核、海马，测定 miＲ － 16 和 5 － HT 转运体蛋白。结果 模型组大鼠脑脊液和中缝核的 miＲ － 16 相对表达量低于对照组，中缝核 miＲ － 16与 5 － HT 胺转运体呈负相关; 而前额叶皮质和海马中的 miＲ － 16、5 － HT 转运体分别与对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞0. 05) 。结论 中缝核 miＲ － 16 可能通过调节 5 － HT 转运体的表达，参与抑郁症的病理过程，脑脊液 miＲ － 16 亦可能与抑郁症相关。
关键词 慢性不可预知温和应激抑郁模型;miＲ － 16;5 － HT;转运体
世界卫生组织公布，抑郁症已成为世界第 4 大疾患，预计到 2020 年，可能成为仅次于冠心病的第 2 大疾病。抑郁症具有患病率高( 终生患病率女性为10% ～ 25% 、男性为 5% ～ 12% ) 、复发率高 ( 1 年30% ，5 年 70% ) 、自杀率高( 10% ～ 25% ) 等特点，是全球性公共卫生问题之一，给个人、家庭和社会带来极大的精神损失和巨大的经济负担。然而，其病因和发病机制尚未清楚，给该病的诊断和治疗带来极大困难。microＲNAs( miＲNAs) 是近年来表观遗传学研究的热点，是一类进化保守的、18 ～ 25 个核苷酸的非编码 ＲNA 分子，通过与靶基因的 mＲNA 3'非翻译区( 3' － untranslated region，UTＲ) 结合，引起 mＲNA的降解或者翻译的抑制，从而调节蛋白表达，在生物发育和疾病发生、发展中起重要作用。现有的研究揭示，miＲ － 16 可能与抑郁症相关，其参与抑郁症的机制，可能是其在脑组织中以 5 － 羟色胺( 5 － HT)转运体( serotonin transporter，SEＲT) 基因作为靶基因，参与 SEＲT 翻译水平的调控，从而影响脑组织内5 － HT 神经递质功能发挥。但至今尚未明确神经系统中的哪些部位参与抑郁症的发病。本实验通过建立大鼠慢性不可预知温和应激抑郁模型，比较抑郁模型组和对照组 miＲ － 16 在不同部位( 脑脊液、前额叶皮质、海马、中缝核) 的差异，以及分析 miＲ － 16与 SEＲT 蛋白的相关性，旨在探明 miＲ － 16 参与抑郁症的作用部位及其机制，为弄清抑郁症的发病机制以及寻找合适的生物学标志物提供参考。
材料与方法
1． 实验动物及分组: 清洁级雌性 SD 大鼠 20 只，购自浙江省医学科学院，实验动物合格证号: SCXK( 浙) 2008 － 0033，体重约 150g，随机分成对照组( 10 只) 和抑郁模型组( 10 只) 。饲养室温度 23 ± 1℃ ，相对湿度 55% ± 5% 。
2． 抑郁模型建立: 慢性不可预知温和应激( chronic unpre-dictable mild stress，CUMS) 模型组大鼠每天随机接受以下刺激中 的 1 种: 4℃ 冰 水 浴5min、禁 水 24h、昼 夜 跌 倒、悬 尾10min、45℃ 高温 5min、禁食 48h、鼠笼倾斜 24h、潮湿垫料 24h、夹尾 1min、束缚应激 2h，连续 3 周。对照组大鼠每天 12h 明亮( 8: 00 ～ 20: 00) 、12h 黑暗( 20: 00 ～ 8: 00) ，自由摄食饮水。
3． 抑郁行为评定: 采用糖水消耗实验和旷场实验评定抑郁样行为。
(1) 糖水消耗实验: 造模前和造模后各 1 次，分 3天完成，第 1 天将大鼠单笼饲养，给予 2 瓶 1% 的蔗糖水; 第 2天，将其中 1 瓶蔗糖水换成自来水，进行蔗糖水偏好训练。第3 天，大鼠禁水 23h 后，给予 1 瓶 1% 蔗糖水和 1 瓶自来水，计算 1h 内蔗糖水和自来水消耗量，进行糖水偏好率测定。糖水偏好率( % ) = 糖水消耗量/( 糖水消耗量 + 自来水消耗量) ×100% 。
(2) 旷场实验: 长宽高分别 100cm、100cm 和 40cm 的容器（上海欣软提供），底部等分为面积相等的 25 格，内壁为黑色，容器正上方放置一个摄像头，将单只大鼠放入中央，纪录 3min 内的行走得分与垂直得分( 行走得分: 大鼠 3 只爪子进入 1 个格子计 1分; 垂直得分: 大鼠前爪离地或攀附桶壁 1 次计 1 分) 。旷场试验固定在 18: 00 ～ 19: 00 时进行，安静黑暗环境，并每次都清理大鼠排泄物，去除可能留下的味道。每只大鼠造模前与造模后共进行 2 次旷场试验。
4． 脑脊液、前额叶皮质、海马、中缝核组织的取材: 抑郁行为学指标测定后，在大鼠麻醉后，头部固定于定向仪上。头颈部剪毛、消毒，用手术刀沿纵轴切一纵行切口( 约 2cm) 用剪刀钝性分离颈部背侧肌肉。为避免出血，最深层附着在骨上的肌肉用手术刀背刮开，暴露出枕骨大孔，由枕骨大孔进针直接抽取脑脊液。断头处死大鼠，按包新民等的大鼠脑立体定位图谱，在冰上迅速分离前额叶皮质、海马和中缝核。
