WAVETM 生物反应器中的 Cytodex™ 微载体细胞培养工艺（三）
结果和讨论
微载体培养的最佳工作体积和混合速度的确定当我们使用 20%到 80%的Cellbag最大工作体积时，微载体培养可以产生均匀的微载体混合分布（图 2）。
图 2. 微载体培养的最佳工作体积
在工作体积小于 20%的 Cellbag 最大工作体积时，部分微载体有可能粘在 Cellbag上，而超过80%工作体积可能会产生不均匀的微载体混合。
图 3显示摇动角度为5º、6º和7º时所获得的微载体均匀混合。超过8 rpm的摇动速度产生均匀的微载体混合效果。在摇动速度为16 到 20 rpm时MDCK细胞从微载体上脱落。
图 3.确定获得均匀混合的微载体溶液所需的最低混合条件，以及使用Cellbag-10 L时细胞从微载体上脱落前的最大混合条件。Cellbag-10 L的混合条件和 Cellbag-50 L相似，50 L的 Cellbag使用6 rpm和7º就可以获得均匀混合。
MDCK细胞贴附微载体 (2% FBS)
研究的目的是为了找到在WAVE Bioreactor System 20/50（细胞培养体积达到 25L）中MDCK细胞贴附到Cytodex 3微载体的最佳条件，在培养前4 h 的贴壁阶段，我们比较了3种不同的混合方式：
1） 间歇混合：每 30 min 以 12 rpm 和 6º间歇混合2 min（图4），其他时间停止摇动；4 h 后采用连续摇动(10 rpm和 5º)
图 4.在10 L Cellbag中前4 h内，每30 min间歇混合2 min (12 rpm和6º) ，4h后采用连续摇动（10rpm和 5º）
2） 半间歇混合：每30分钟以12 rpm 和6º加速混合2 min，其他时间保持6 rpm 和3.3º的低速连续摇动。4 h后采用连续摇动(10 rpm和5º)
图 5.每30分钟（12 rpm和6º）加速混合2 min，然后（在6 rpm和3.3º）保持低速连续摇动混合，如此半间歇混合4 h。4 h后，混合参数被设置为 10 rpm和5º连续摇动。
3） 连续摇动混合：摇动速度8 rpm和5º。4 h后采用连续摇动(10 rpm和5º)
图 6.在Cellbag-10 L中前4 h培养以8 rpm和5º连续混合。4 h后混合参数被设置为10 rpm和5º。
