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Cytodex 1, Cytodex 3 球形微载体的使用（一）

2020.7.07

用于细胞培养的微载体

微载体培养（microcarrier culture）是一种用于高产量培养贴壁细胞的实用技术。CytodexTM专用于培养各类动物细胞，其培养体积可以从数毫升到6000升以上。应用Cytodex微载体技术，可以实现简单的贴壁细胞悬浮化培养，每毫升培养液可得到数百万细胞。微载体适于摇瓶、转瓶、搅拌罐以及WAVE生物反应器等各种培养系统。

应用范围

Cytodex技术为进行动物细胞的培养提供了新的选择。该微载体为动物细胞的生长提供了适宜的表面，并可用于悬浮培养系统。还可用于增加单层细胞培养容器（例如培养板、培养皿及培养瓶）及灌注室（perfusion chambers）中的细胞产量。其应用范围为大量生产各类细胞、病毒及重组细胞产物（例如，干扰素，酶，核酸，激素）；研究细胞贴壁、分化及细胞功能；灌注柱式培养系统（perfusion column culture systems）；显微镜检查研究；获取有丝分裂细胞；分离细胞；膜研究；细胞的保存和运输，细胞迁移的检测及标记化合物的摄取研究。

产品特性

Cytodex 的设计能够满足微载体技术的特殊需要。

●Cytodex 的大小和密度经优化处理，以保证培养各类细胞时使其生长良好，产量提高。

●培养基架为生物学惰性，可为悬浮微载体培养提供坚实而非刚性的培养面。

●微载体透明，可直接使用显微镜观察或染色后观察。

Cytodex 1以交联葡聚糖基架（cross-linked dextran matrix）为基础，该基架被带正电荷的N，N二乙胺基乙基基团（N, N-diethylaminoethyl groups）取代。该带电基团遍布于整个微载体基架中。

Cytodex 3含有一层较薄的变性胶原，与交联葡聚糖基架化学偶联。 Cytodex3 上的变性胶原层易被胰蛋白酶和胶原酶等多种蛋白酶消化，因此，能在维持细胞最大活性、功能和完整性的同时将细胞从微载体上分离出来。

Cytodex的参数

如何选择Cytodex

关于如何选择适合于某种特定应用的Cytodex的具体细节请参阅《微载体细胞培养：原理与方法》（18-1140-62）手册，GE Healthcare可提供本书。Cytodex1适用于通用微载体培养（general purpose microcarrier culture），尤其适用于大多数已建立的细胞系（established cell lines）。在对培养产物的最大回收率无要求时，该微载体也可用于原代细胞和正常二倍体细胞系的培养。Cytodex3是用于某些难以生长的细胞、分化细胞培养系统、尤其是具有上皮样形态学特征细胞的首选微载体。此外，在逐级扩增培养（scaling up）和需要最大限度的保留细胞活性和膜完整性的简单回收细胞时，推荐使用该微载体。

注意：Cytodex 3可以提供通用胶原包被的细胞贴壁表面。

用法说明

应用Cytodex进行微载体培养的具体细节，请参阅《微载体细胞培养：原理与方法》（18-1140-62）手册，GE Healthcare 可提供本书。

准备工作

干燥的微载体在无 Ca^2＋和 Mg ^2＋的磷酸缓冲液（PBS）（每克Cytodex加 50-100ml）中在室温下浸

泡膨胀至少 3 小时。弃去上清液，用新配制的无 Ca ^2＋、Mg ^2＋的 PBS（每克 Cytodex 加30-50ml）洗涤微载体数分钟。弃去 PBS，换上新的无 Ca ^2＋、Mg ^2＋的 PBS（每克Cytodex 加30-50ml），然后，微载体溶液用高压灭菌法灭菌（115℃，15min，15psi）。Cytodex非常稳定，可以反复（至少5 次）长时间（130℃，12h，27psi）进行高压灭菌而不影响其性能。所有溶液的 pH应为 7.4。

注意：在水化 Cytodex3 时，最初，Cytodex3 的表面张力有时会阻止微载体的湿化和沉降。如果出现这种情况，在第1次水洗所用的PBS 中加入Tween 80 （每100ml PBS加 2-3滴 Tween 80）以预防。

Cytodex 也可以用乙醇消毒。微载体在用无Ca ²⁺、Mg^2＋的 PBS 膨胀后沉降，弃去上清液，换上 70％（体积比）的蒸馏水稀释乙醇。用该溶液洗两遍微载体，然后移入新的70％的乙醇溶液（每克Cytodex 加 70-100ml）孵育过夜。然后，移去乙醇溶液，在使用前，Cytodex用无菌的无Ca ^2＋、Mg ^2＋PBS（每克Cytodex加50ml）洗 3 遍，用培养基（每克Cytodex加 20-50ml）再洗 1遍。

在使用前，待无菌的微载体沉降后，弃去上清液，用预热过的培养基（每克 Cytodex 加 20-50ml）简

单地洗1遍微载体。当微载体沉降后，倒掉上清液，将微载体转移至培养容器中。

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