锂－匹罗卡品大鼠癫病模型制作实验
实验方法原理 癫痫(epilepsy)是最常见的神经系统疾病之一。其特征是反复性惊厥发作，伴随不同的临床和脑电图表现。动物实验是研究人类癫病发病机制最主要的手段，目前已有数十种动物模型应用于癫痫研究，根据产生的方式分为遗传性和人工诱发性。选择动物模型取决于所需解决的问题、癫寐类型及研究目的。本节主要介绍锥－匹罗卡品点燃大鼠癫病模型，该模型由Honchar等于1983年首次报道。其具有同人类癫病持续状态(status epilepticus,SE)或颞叶癫痫相似的特征表现，适用于探讨颞叶癫痫形成机制及筛选抗癫痫药物，用于SE及复杂部分性发作的分子生物学和电生理等多方面研究。模型制作机理为：乙酰胆碱(ACh)在癫痫的发生中发挥着重要作用，ACh受体激动剂匹罗卡品全身给药可引起癫痫发作；氯化锂可有效提高机体对匹罗卡品的敏感性，使匹罗卡品的用量减少，显著降低因匹罗卡品毒性作用所造成的动物死亡率；溴甲基东莨菪碱主要用于减轻匹罗卡品引发的周围神经系统反应（血泪、流涎等）。
实验材料 成年SD大鼠(200-250g)
试剂、试剂盒 氯化锂匹罗卡品溴甲基东莨菪碱苯巴比妥钠注射液0.9%生理盐水
仪器、耗材 注射器
实验步骤
1.按照预计实验动物数估算所需各种药品的总需要量，分别称取总需要量的溴甲基东莨菪碱、氯化锂和匹罗卡品，用0.9%生理盐水（需过滤）将实验药品溶解为工作浓度。
2建模前1d,氯化锂3mmol/kg腹腔注射。
3.氯化锂注射后18-20h,皮下注射溴甲基东莨菪碱1mg/kg,并记录给药时间。
4.30min后给予首剂匹罗卡品30mg/kg腹腔注射，观察大鼠癫痫样发作程度。此后每隔30min给予10mg/kg追加剂量腹腔注射，直至出现Ⅳ级以上无明显间歇的SE样发作（见结果判读）。极量为60mg/kg。
5.SE后1h,注射苯巴比妥钠40mg/kg终止发作。
6.注射苯巴比妥钠30min后给予皮下注射生理盐水10ml,用以补充建模过程中所致的体液损失。
7.结果判读:
（1）模型分级标准：大鼠癫病发作症状采用Racine分级标准：
①0级无任何反应；②Ⅰ级面部阵挛，包括眨眼、动须、节奏性咀嚼等；③Ⅱ级：Ⅰ级加节律性点头；④Ⅲ级：Ⅱ级加前肢肌阵挛，但无后肢直立位；⑤Ⅳ级：Ⅲ级加后肢直立位；⑥Ⅴ级全面性强直－阵挛发作，并失去体位控制。实验动物出现连续1h的Ⅳ级及以上程度发作，可判定为建模成功。:
（2）癫病模型分期：本癫痫模型在时间上主要分为三个时期：
①急性期Pilocar-pine注射后几分钟至1h内发生并持续约24h的SE状态，此状态以强直－阵挛全身性发作为特征；
②潜伏期在SE之后，发作得到缓和，几乎没有癫病发作，又称为沉默期，可持续1周至数周；
③慢性癫痫期 在潜伏期之后，以反复性自发癫痫发作(SRSs)为特征，平均每周发作2-3次。脑电图表现：①急性期可见海马区出现显著的0节律和皮层的低压快速电活动，并在海马发展成为带有棘波的高压快速电活动；②在潜伏期显示出正常的EEG活动；③慢性期，初始的SRSs常以无皮层记录改变的阵发性海马发放为特征，其后逐步演变为分级的皮层、海马同步化发放。
注意事项
1.匹罗卡品需在建模前新鲜配制，使用过程中避光存放，以确保药效。
2.小鼠程序同大鼠，所选动物体重范围20-25g。以C57BL/6小鼠为例，建模药物剂量为氯化锂10mmol/kg,匹罗卡品100mg/kg。
3.若匹罗卡品注射已达极最，大鼠仍未出现Ⅳ级及以上程度发作，则可认为建模失败。
其他
1.建模过程中，若见大鼠出现间断性IV级发作，伴有持续的Ⅲ级发作，且发作过程中无明确的自主爬行及摸索动作，也可判定为符合模型标准。
2.笔者曾在大鼠出现Ⅲ级发作时及时应用苯巴比妥钠终止发作，建立轻度癫病发作模型,组织学染色证实大鼠海马区出现不同于SE后的病理学改变。
3.大鼠在建模成功后1周内因频繁癫痫发作，死亡率较高。可每天给予5%葡萄糖氯化钠3-5ml腹腔注射，2/d,加强能量供给。
