常规动物实验模型制作（复制）方法（三）
六、Alzhermer病的动物模型
SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥钠(35-40mg/kg体重)腹腔麻醉动物后，固定在脑立体定位仪上(参照大鼠全脑立体定位图谱)，以前囟为零点，选出进刀坐标：前后坐标(AP)1.8mm，中线旁开(L)坐标1.0mm，腹侧坐标(v)4. 0mm。首先用牙科钻在上述坐标的钻孔开骨窗，去除颅骨，挑开硬脑膜，用自制双刃不锈钢刀片(宽2mm，厚0.1mm)按上述坐标从脑冠状面插入脑内。然后，将刀向外移动1.5mm，再降刀1mm，并上下抽刀10余次，以完全切断弯窿海马伞。最后将刀片退至L1.0mm处，抽出刀片。
动物分组
1. 实验组：10只，按上述方法切断左侧穹窿海马伞；
2. 假手术组：10只,开颅并挑开硬膜膜，切断皮质，但不切断穹窿海马伞，最后缝合头皮；
3. 空白对照组：10只，做水迷宫行为学检测和电生理检验。以Morris水迷宫行为学检测。（提供两种数据）定位航行能力。
七、神经系统疾病模型
实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE) 是一典型的实验模型。早在1944年Ferraro根据对一系列实验结果的总结，指出EAE和人的脱髓鞘病有相似之处。1947年Freund等报告,以脑或脊髓加Freund佐剂(FA) 进行免疫，仅需一次注射就能引起豚鼠EAE，而且成功率相当高。以后，以兔、小鼠、大鼠、 羊、猫、田鼠及猴等动物用同样方法均能复制成功，以豚鼠最为敏感。这里介绍用同种脊髓加FA进行免疫复制EAE的方法。
Freund氏左剂的制备参照Paterson的制法,液体石腊(c.p)8.5ml，无水羊毛脂(c.p)1.5ml，结核菌。用上述混合液配成4mg/ml的FA。高压灭菌后使用。
脊髓组织悬液：于实验当时，在无菌条件下先将豚鼠肝素化，然后经胸主动脉用生理盐水灌洗至无血。取出脊髓，除去脊膜，称重，用玻璃研磨器将脊髓研成匀浆，以生理盐水配制成50％悬液。
脊髓-FA乳剂的制备：将脊髓组织悬液与FA按1:1混合，用注射器反复抽注，即成乳剂。
选用体重400g左右的豚鼠，于豚鼠的四个足掌肉垫各注射脊髓-FA 0.1ml， 每只豚鼠共注射0.4ml。注射后按常规饲养。
免疫注射半月后，血清中逐渐出现抗脊髓抗体，皮肤试验呈延缓反应，而且豚鼠陆续出现后肢瘫痪，甚至大小便失禁，很易死亡。血清补体结合反应：由豚鼠心脏抽血，以3，000转/分离心30分钟分离血清。 抗原为1％脊髓生理盐水悬液，也经3，000转/分离心1小时，取其上清液作试验用。补体为2应用单位，溶血系统为2％绵羊红细胞及2单位的溶血素。
皮肤试验：将豚鼠背部剃毛，用10％同种脊髓生理盐水悬液0.1ml作皮内注射， 注后当时及24、48小时观察皮肤反应。本实验在注后当时不见皮肤反应，而在24小时出现红斑或硬结，48小时仍存在，所以是延缓型反应。
组织学检查：在实验终了时处死动物，取出脑及脊髓等欲检查的脏器，福尔马林固定，常规切片、染色作镜检。可见脊膜及中央管周围有明显的淋巴样组织浸润、增厚，脊髓白质内有细胞浸润的小灶状病变及静脉周围呈套袖样浸润。神经细胞有坏死，细胞核消失呈匀质小体，或细胞体消失留下一空隙，以及细胞周围有圆细胞浸润等。在脑组织中可见到脑膜增厚，淋巴样细胞及单核细胞浸润。室管膜及脉络膜亦呈同样变化。小静脉及毛细血管周围，则呈套袖状细胞浸润。脑实质内有小胶质细胞组成的浸润灶。有些星状细胞呈核碎裂、胞浆苍白、细胞变形等。上述变化以脊髓的病理改变和瘫痪最为一致,是最特异的变化，仅见于注射脊髓加FA引起瘫痪的动物。血清抗体虽也有特异性,但与瘫痪或脊髓病变的程度无一致性关系；而皮肤反应则既有特异性，又与瘫痪及脊髓病变呈一致性。文献报导还曾指出，这种模型不能用血清抗体进行传递，但用淋巴细胞被动传递则能成功。提示病变的本质属于细胞免疫机制。至于脑内的变化,特异性较差,用FA或其它组织悬液加FA注射的动物也能发现，唯程度轻的多，可能是FA本身引起的，也可能因为其它组织和脑脊液之间有某些共同抗原性，从而引起交叉反应之故。
八、动物高血压模型的建立
1.直接刺激中枢神经法
采用埋藏电极或借助于立位定各器，是刺激大白鼠或猴的侧下丘脑防御警觉区，可使动物血压明显升高，心率加快和心输出量增加等。
2.神经反射性高血压
可选狗进行，以波长0.1毫秒、频率5～50次/秒的方波刺激狗的隐神经、喉上神经或精神迷走神经中枢端，刺激时间为15秒，可使狗的收缩压和舒张压均升高20～100mmHg。
3.肾源性加压物质的注射法
选用大白鼠、家兔或狗，实验前将动物两侧肾脏摘除，手术后几小时或经24小时后，给动物静脉注射或滴注肾提取物、肾素或人工合成的血管紧张素（Angiotensin）均可使血压明显升高。切除动物肾脏后几小时，血中血管紧张素原（Angiotensinogen）即开始上升。24小时后可增达高峰，大白鼠血中血管紧张素原值可增加14～15倍，狗约增加3倍。从而大大提高了动物对外源性肾脏加压物质的敏感性。
4.体液性加压物质注射法
选用狗、猫或兔按2～8μg/Kg剂量静脉注射肾上腺素或去甲肾上腺素时，可引起血压显著而短暂的升高。给大白鼠静脉注射0.5～3μg肾上腺素或去甲肾上腺素，亦可出现与上相似的血压上升。若欲使血压维持长时期的升高，可采取上述药物静脉滴注给药。给狗或猫静脉注射0.1～0.6μ后叶加压素或给大白鼠静脉注射0.006～0.008u后叶加压素，均可导致受试动物的血压显著上升，但重复注射易出现耐受现象。
5.子宫胎盘缺血型急性高血压法
选用妊娠家兔，通过胎盘作“Z”字形缝合，造成子宫胎盘缺血，手术后血压逐渐升高，于1/2～2小时升达高峰。但注意缝线不要穿过子宫壁，否则将不发生高血压。
