提RNA 需要最少的细胞量是多少
加入1ml TRIzol裂解细胞(用手剧烈摇晃),装入1.5ml Eppendorf管中,冰上放置10min。
加入200μl氯仿,震摇15s,冰上放置5min。
13500rpm,4℃离心15min。
收集上清水相一般为500uL,加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀,冰上放置10min。
13500rpm,4℃离心10min,弃上清。
加入1ml的75%乙醇,上下颠倒混匀后冰上放置5min,12000rpm,4℃离心5min。
弃上清,待残余乙醇挥发殆尽后,沉淀重悬于20μl用DEPC处理水中,存于-70℃。
用分光光度计测OD260/280nm波长的吸光值鉴定RNA浓度,以琼脂糖凝胶电泳证实其完整性。
10-5细胞数,提取的浓度一般检测为500-1000ug/mL(转载)
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