凋亡聚焦：选择合适的TUNEL分析
考虑检测方法
TUNEL分析一般采用显色法或荧光检测法。每一种都有其各自的优缺点，因此选择哪一种取决于您的需求。荧光检测感更为灵敏，但难以保留信号。由于成像时的光漂白，且随着时间的流逝，荧光信号会逐渐丧失。荧光信号也会有更高的背景问题，这要取决于组织类型。显色分析适用于组织切片，因为可以使用光学显微镜，并且您可以开展进一步的形态学分析，并永久记录。
显色检测
市场上有多个显色检测试剂盒可供选择，特别是原位或组织研究。罗氏就提供了四种版本的In Situ Cell Death Detection Kit，两个荧光版本：荧光素和TMR Red;两个显色版本，分别利用过氧化物酶或碱性磷酸酶检测。
上文也提到过，R&D Systems/ Trevigen推出了适合不同组织的试剂盒，其中包含了显色检测试剂和复染剂，使对比度更高。其中，TACS XL® Kit提供了两种显色底物，分别为：TACS-Blue Label™或DAB。TACS-Blue Label是一种即用型的检测试剂盒，灵敏度比DAB更高，但不是永久的染料。如果组织和结果需要存档，那还是DAB更合适。
此外，R&D Systems/ Trevigen还提供两种可定量的TUNEL试剂盒，TiterTACS™ 和FlowTACS™。TiterTACS™利用酶标仪测定吸光度变化，可定量特定细胞群体中的凋亡信号，适合培养中的贴壁细胞。FlowTACS则包含荧光素标记的链霉亲和素，在与PI结合使用时，可利用流式细胞仪来定量凋亡细胞。FlowTACS适合悬浮细胞以及解离的贴壁细胞。
荧光检测
荧光相对显色检测的一个好处是多重检测，这样能节省时间和材料，让各个反应在相同的实验条件下开展。这对于验证凋亡结果特别重要。上面提到过，Click-iT® TUNEL Assay就提供三种不同颜色：绿色、橙色和红色。Alexa Fluor® 染料可是Life Tech的旗舰产品，比其他荧光染料更明亮更稳定。
除了两种荧光的In Situ Cell Death Detection Kit，罗氏还推出了一种新的DNA片段化成像试剂盒。此试剂盒可快速检测哺乳动物细胞的凋亡，适合中等至高通量的分析。操作步骤经过改善，洗涤步骤更少，细胞损失的风险也就更低。对于一块96孔板的分析，所需的总时间仅为85分钟。它适用于手动的显微镜或自动的成像系统，如罗氏的Cellavista系统。试剂盒还提供了细胞核染料Hoechst 33342，可染色活细胞和死细胞的核，这样即可同时确定细胞总数以及凋亡细胞的比例。
由此可见，TUNEL分析的选择可真不少，大家可根据自己的样品、仪器，参考价格、售后等因素，自由地挑选。
