气相 液相 离子色谱 气质 液质 SPE 红外 紫外 拉曼 近红外 ASS OES AFS ICP-MS 微波 电镜 天平 纯水设备 测序仪 移液工作站 COD 粒度仪
关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×
头像

分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

3.7 核酶切割 RNA 专一位点

2019.3.27

核酶是获得长片段 RNA 特定位点切割产物的有用工具，可用于研究 RNA 修饰，修饰位点分析，以及获得具布不间长度末端的 RNA 转录产物。

实验材料

合成的核酶分子切割底物RNA

试剂、试剂盒

Tris-HClMgCl2

实验步骤

一、材料与设备

1)500 mmol/LTris-HCl(pH7.4)

2)100 mmol/LMgCl2

3) 合成的核酶分子

4) 切割底物 RNA


二、操作方法

1) 制备切割混合构：不超过 l0 pmol 底物 RNA，l pmol 合成的核酶分子，加水至 8ul, 加 l ul 500 mmol/L Tris-HCl(PH7.4)，混匀。

2) 于 75℃ 加热 1 min, 然后置于冰上。

3) 加 1ul 100 mmol/L,MgCl2 于 42℃ 孵育 lh。

4) 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，回收。

收起 
注意事项

1) 切割底物 RNA 和核酶可以通过体外转录的方式获得。

2) 切割底物 RNA 要与核酶匹配，若底物与核酶具较长的碱基配对则可以提髙酶切的特异性，但会降低切割转换数，因此一般选择 5-7 个核苷酸作为互补匹配区。

3) 为获得最佳的切割效果，底物 RNA、核酶的用量，镁离子的浓度、反应温度和反应时间均应通过试验确定。


rna
互联网
推荐
推荐作者
仪器推荐
热点排行
一周推荐
关闭

Copyright ©2007-2021 ANTPEDIA, All Rights Reserved

京ICP备07018254号 京公网安备1101085018 电信与信息服务业务经营许可证：京ICP证110310号