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鸡ELISA试剂盒实验结果与测定

2019.12.11

鸡ELISA试剂盒由补体引起的干扰可通过下述方法避免:

(1)对临床血清标本加热灭活补体:采用56~C30 min加热可使标本中的补体C1。灭活。

(2)包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体:鸡抗体不激活人的补体系统,因此,使用特异的鸡抗体,不会出现因补体激活而存在的假阳性和假阴性干扰。

异嗜性抗体(heterophilieantibodies) 人类血清中含有抗啮齿类动物(如鼠、马、羊等)的免疫球蛋白(1g)的抗体,即天然的异嗜性抗体。有研究表明,天然的异嗜性抗体(1gG)可分为两类,一类(85%的假阳性由其引起)可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域,但不与兔IgG的Fab区结合。另一类(15%的假阳性由其引起)可结合于小鼠、马、牛和兔IgG的Fc区表位,但不与山羊和大鼠IgG的Pc区表位结合。异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗而出现假阳性反应。由异嗜性抗体引起的干扰可通过下述方法避免:

(1)鸡ELISA试剂盒使用特异的兔F(ab’)2。片段作为固相或测定酶标抗体。

(2)在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig,封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。

(3)使用靶特异的非Ig亲和蛋白(affibody)替代固相或酶标抗体之一。采用噬菌体展示技术展示来自单个金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)联合文库的人IgA结合亲和蛋白,用于IgA的测定,不受异嗜性抗体的影响。

(4)使用特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。

4.因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体 在临床上,有尝试使用鼠源性单克隆抗体进行靶向治疗,及使用放射性核素标记鼠源性单克隆抗体进行影像诊断等,均有可能使相应患者体内产生抗鼠抗体。这种抗鼠抗体对使用鼠源性单克隆抗体的酶免疫测定,可产生假阳性结果。由抗鼠抗体引起的干扰可通过下述方法避免:

(1)使用特异的抗体F,bf):片段作为固相或测定酶标抗体。

(2)在标本或标本稀释液中加入过量的鼠Ig,封闭可能存在的抗鼠抗体。

(3)使用特异的鸡抗体IgG作为固相和测定抗体。鸡IgG不与人抗鼠抗体反应。因而,用其作为固相或酶标抗体不会出现假阳性结果。

5.自身抗体 自身抗体如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等,能与其相应靶抗原结合形成复合物,在ELISA试剂盒方法中可干扰相应抗原抗体的测定。为避免以上情况出现,可在测定前用理化方法将其解离。

6.鸡ELISA试剂盒溶菌酶 溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5,因此,在双抗体夹心法ELISA试剂盒测定中,溶菌酶可在包被的IgG和酶标的IgG间形成桥接,从而导致假阳性。因此,为保证鸡ELISA试剂盒测定的可靠性,有必要从标本中去除溶菌酶或将其封闭,Cu2+离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶,防止其连接IgG。

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