肝细胞癌中bcl-2及bax基因的表达及临床意义
作者：钱燕春，唐 平 作者单位：（永州职业技术学院医学院，湖南永州 425000）
[摘要] 目的：探讨凋亡抑制基因和凋亡促进基因bax表达与肝细胞癌生物学行为的关系及对肝细胞癌预后的关系。方法：用免疫组化LSAB法测定40例肝癌细胞和16例正常肝组织的bcl-2和bax蛋白表达水平。结果：bcl-2及bax蛋白表达阳性率在正常肝组织和肝细胞癌分别为12.5%(2/16)、45.0%(18/40)、87.5%(14/16)、52.5%(21/40)，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。bcl-2、bax蛋白表达与肿瘤病理分级、分期、淋巴结转移及患者预后相关。结论：bcl-2和bax蛋白的表达参与肝细胞癌的发生及进展，并存在相互作用的关系。bcl-2蛋白表达在肝癌有独立预后价值。
[关键词] 肝细胞癌；细胞凋亡；癌基因；bcl-2蛋白；bax蛋白
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2009）04（b）-010-02
Expression of Gene bcl-2 and bax in liver cell carcinoma and its clinical significances QIAN Yanchun， TANG Ping（Vocational and Technical College School of Medicine of Yongzhou，Yongzhou 425000，Chian）
[Abstract] Objective: To study the role and the prognostic effect of bcl-2 and bax in the development to liver cell carcinoma. Methods: Bcl-2 and bax expression was investigated in 40 cases of liver cell carcinoma and 16 cases of mormal liver tissue by immunohistochemistry LSAB method. Results: The positive rates of bcl-2 and bax expression were 12.5%(2/16)and 87.5%(14/16) in normal liver tissue and 45.0%(18/40) and 52.5%(21/40) in liver cell carcinoma.The difference was of significance(P＜0.05).Bcl-2 and bax expression levels were associated with histological grade stages，lymph node metastasis and prognosis. Conclusion: The increased expression of bcl-2 and decreased expression bax might be involved in the development of liver cell carcinoma，and they might have a mutual effect on each other. bcl-2 protein is an independent indicator of prognosis in liver cell carcinoma.
[Keywords] Livercellcarcinoma； Apoptosis； Oncogene； bcl-2 protein；bax protein
近来的研究表明，肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病，也是细胞凋亡异常的疾病，细胞凋亡状态及其调控基因的异常，参与肿瘤的发生、发展[1]。bcl-2和bax基因是近年来发现的细胞凋亡相关基因，它们与肿瘤的发生、发展及预后有密切关系。本研究利用免疫组化LSAB法检测了40例肝癌组织中bcl-2和bax基因产物的表达，探讨bcl-2和bax基因在肝癌发生发展中的作用和临床意义。
1资料与方法
1.1一般资料
40例肝细胞癌组织标本为永州职业技术学院医学院附属医院2000年5月～2001年12月手术切除并经病理诊断的肝肿瘤患者，所有患者术前未接受放（化）疗，均有完整的随访资料，随访期为5年。其中，男35例，女5例。年龄36～70岁，平均52.5岁。按FIGO分期：Ⅰa期4例， Ⅰb期5例， Ⅱa期12例， Ⅱb期19例；按WHO分级：Ⅰ级9例，Ⅱ级18例，Ⅲ级13例；术后病理证实有淋巴结转移者12例，术后5年内死亡者33例。另取16例正常肝组织作对照，为取自距肿瘤边缘2.0 cm处的正常肝组织。全部标本均经10%的甲醛固定，石蜡包埋，常规制备，5 μm连续切片。
1.2试剂
兔抗人bax多克隆抗体及小鼠抗人bcl-2单克隆抗体为SantaCruz公司产品，工作浓度1∶70、1∶50；LsAB试剂盒购自中山生物技术公司。
1.3方法
采用免疫组化LsAB法，其操作步骤按试剂盒说明书进行。阴性对照以PBS代替一抗。
1.4结果判定
在光镜下观察，以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性。随机计数10个高倍视野(×400)，500个细胞中阳性细胞百分率＜10%(-)，≥10%为阳性(+)。
1.5统计方法
?字2检验及四格表确切概率法。
2结果
2.1肝细胞癌和正常肝组织bcl-2及bax蛋白表达的比较
肝细胞癌和正常肝组织的bcl-2及bax蛋白表达阳性率比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。bcl-2在肝癌细胞中表达阳性，见图1。
2.2 bcl-2、bax蛋白表达与肝细胞癌病理特征的关系
bcl-2表达阳性率随肿瘤分级而增高，统计学检验差异有统计学意义(P<0.05)，bax表达阳性率则随肝癌分级增加而有递减趋势(P<0.05)；Bcl-2与临床分期呈正相关(P<0.05)，bax表达与肝癌临床分期呈负相关(P<0.05)；有淋巴结转移者较无淋巴结转移bcl-2表达呈增高趋势(P<0.05)，bax呈降低趋势；Bcl-2表达与生存年限与血常比较差异有统计学意义(P<0.05)，bax表达在预后不良组较预后良好组有降低趋势。见表2。
3讨论
细胞凋亡是在基因控制下的细胞自我消亡的过程，涉及一系列的基因表达的级联反应，受凋亡抑制基因和凋亡促进基因的调控。Vaux 等[2]首先证实bcl-2 基因高表达可明显延长细胞的生存期。体外研究亦表明bcl-2可阻止许多刺激物诱发的细胞凋亡，且bcl-2的抑制可能是细胞凋亡的共同通道[3]。就肿瘤的形成而言，bcl-2过度表达使细胞生存延长，这类细胞因此获得其他基因异常的机会，同时由于阻止了正常的凋亡途径，使DNA 受损的细胞持续生存，实变产物积聚，从而促进肿瘤发生发展。bax是bcl-2家族的另一成员，与bcl-2形成异二聚体，对细胞凋亡进行调控，它的过表达可拮抗bcl-2的保护效应使细胞趋于凋亡[4-5]。在体内， bcl-2 与bax 相互影响，相互拮抗，其作用并不直接表现为单独的bcl-2和bax对凋亡的影响，而是由bcl-2/bax来决定细胞是否发生凋亡。有人研究证实 bcl-2/bax 比值降低，可使肿瘤细胞发生凋亡，作为细胞凋亡调控的主要因子bcl-2蛋白家族，尤其是bcl-2和bax的相互作用在凋亡的调节中起关键作用[6-7]。
本研究结果显示，在肝细胞癌组织中bcl-2蛋白表达阳性率比正常组高，且随肿瘤分级增加而增加，并且与肝癌临床分期、淋巴结转移及预后呈正相关关系。bax蛋白表达与肝癌分级程度，临床分期及淋巴结转移呈负相关，说明bax的表达与肝癌的存活期延长，细胞凋亡受到抑制有密切关系，且与bcl-2蛋白是相互作用且作用相反的一对基因，提示bcl-2与bax基因蛋白参与了肝癌的发病过程，对探索肝癌的发生、演化是一种新的启示，值得深入研究。综合本研究结果及文献复习，笔者认为bcl-2和bax是一对正负调节基因。bcl-2和bax蛋白都是均一的二聚体，反应时需一个分子bcl-2及一个分子bax结合形成异二聚体。
综上所述，bcl-2和bax蛋白的表达与肝细胞癌的临床分期、分级、淋巴结转移相关，并通过对细胞凋亡的调控参与了肝细胞癌的发生、发展，和预后密切相关。
[参考文献]
[1] Thompson CB. Apoptosisinthepathogenesisandtreat-ment of disease[J].Science，1995，267(5203):1456-1462.
[2] Vaux DL， Cory S， Adams JM. Bcl-2 gene promotes heamopoietic cell survival and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells[J].Nature， 1998， 396 (6709): 345-346.
[3] Baraz L， Haupt Y， Elkin M， et al. Tumor suppressor p53 regulates heparanasegene expression[J]. Oncogene， 2006， 25(28) : 3939-3941.
[4] Cory S， Adams JM. Killing cancer cells by flipping the bcl-2/bax switch[J].Cancer Cell， 2005，8(1):5-6.
[5] Chan SL， Yu VC.Proteins of the bcl-2 family in apoptosis signalling: from mechanistic insights to therapeutic opportunities[J].Clin Exp Pharmacol Physiol， 2004，31(3):119-128
[6] Panasiuk A，Dzieciol J ， Panasiuk B， et al. Exp ression of p53，Bax and Bcl-2 p roteins in hepatocytes in non-alcoholic fatty liver disease[J]. World J Gastroenterol. 2006， 12 ( 38 ) : 6198-6200.
[7] 孙莉静,于建平，袁伟杰，等. Bcl-2和Bax在乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾组织中的表达[J].第二军医大学学报，2007，28（5）：492-494.
