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如何证明RNA反转录是否成功?

2020.2.01

如何证明RNA反转录是否成功?

因为cDNA 是长短不一的 DNA 片断混合物,所以电泳的结果大多是模糊一片的,如果 RNA 丰度较低,电泳也可能是无产物,但是这种情况并不代表 PCR 会无结果。检测 cDNA 可以用定量的方法首先看一下内参有没有扩增出来,内参有结果,cDNA 的质量基本上可以保证。但能扩增出内参,不一定就说明 cDNA 没有问题。

因为内参在 cDNA 中丰度高,很容易扩出。如果 cDNA 存在部分降解,从机率的角度讲,就会大大影响低丰度的目的基因的 PCR 结果,而内参因为依然是高丰度,扩增很可能不受影响。有些 GC 含量高,二级结构复杂的 RNA 模板,低温很难将二级结构打开,使用普通的逆转录酶很难奏效,此时可以选择思科捷AG0304,该酶可耐受高至 55℃高温,能够高效反转录多种 RNA 模板,最大限度将 RNA 逆转录成 cDNA 第一链。

 

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