基因枪操作步骤
微弹制备（金粉母液配制）
（1）称取60mg金粉加入Eppendorf管。
（2）加入1mL 75%乙醇，充分涡旋，静置15min，1500rpm离心5min。
（3）弃上清，加入1mL无菌水，充分涡旋，1500rpm离心5min。重复3次。
（4）弃上清，加入1mL无菌的50%甘油，充分涡旋，-20℃保存。
DNA的包裹
（1）取50μL金粉悬液（指金粉母液）于Eppendorf管。
（2）依次加入5μL质粒DNA（1μg/μL）,50μL 2.5MCaCl2和20μL 0.1M亚精胺。（边涡旋边加入，每加完一样，可振荡2-3秒）。
（3）将上述混好的样品，涡旋1min，冰上静置1min，重复10次。
（4）冰上静置30min。10000rpm离心10sec，去上清。
（5）用250μL无水乙醇冲洗沉淀2次(10000rpm离心10sec，去上清)。
（6）最后用60μL无水乙醇重悬颗粒。
注：金粉很容易沉淀，点膜前要重悬。
PDS-1000/He型基因枪的操作步骤
转化前先靶材料放在高渗培养基（含0.2M山梨醇和0.2M甘露醇的MS培养基）上培养4h（愈伤组织集中放在培养基中间一，直径2-3cm左右）。
（1）在超净台上，75%酒精棉擦洗轰击室，75%乙醇消毒各配件15min，然后晾干。
（2）取10μL DNA包被的金颗粒点于颗粒子弹载体膜中心（一滴一滴滴加，待第一滴干燥后，滴加第二滴，防止金粉颗粒扩散太大）。
阻挡网载体膜
可裂膜
（1）打开真空泵和基因枪的电源开关。真空泵的电源开关，基因枪的电源开关，可裂膜挡盖微粒发射装置
（2） 打开氦气瓶阀门，旋转氦气调节杆，使气压高于所选可裂膜压为1500psi 左右。
（3） 旋下可裂膜挡盖，将可裂膜放在挡盖中央（要放正，防止漏气），将挡盖旋上，用专用扳手加固。
（4） 把微粒发射装置移出轰击室，旋下盖子，加入阻挡网，把微粒载片安装在固定槽中（有微粒的一面朝下），旋上盖子，将微粒发射装置放回轰击室。先打开主阀，再旋转氦气调节杆该表上的气压大于可裂膜的压强。
（5） 将样品盘放置在轰击室的适当位置，关上轰击室门。点上微粒，微粒朝下。
（6）取出微粒发射装置，卸下微粒载膜和阻挡网（阻挡网和微粒载片固定槽放入70%的酒精中浸泡）。
（7）旋下可裂膜挡盖，清除可裂膜碎片。
（8）若PDS-1000/He 不再使用时，关掉氦气瓶的主阀，按住FIRE 开关，放掉气体加速管内的氦气压力，最后关掉一切电源。
注：
（1）可裂膜和微粒载片使用前现在75%的酒精中浸泡10分钟，然后晾干待用。
（2）可裂膜挡盖，微粒发射装置等使用前先用75%的酒精擦洗消毒。
（3）可裂膜，阻挡网和微粒载片需用平头镊子夹取。
（4）亚精胺一般现配现用，如经常使用，可配成1M 的母液，分装于Eppendorf 管中，可于-20℃保存1-2个月。
（5）轰击后靶材料在高渗培养基上培养一段时间（16-20h 左右），再转至其他培养基上培养。高渗培养基就用一般的MS 培养基，0.7-1.5%的琼脂，加0.2M 的山梨醇0.2M 的甘露醇，灭菌后倒平板，洋葱选择里面新鲜的嫩叶切成小块1-2cm 长，置于培养基上，哪面朝向培养基好像没什么关系，高渗的作用是使细胞失水。轰洋葱表皮细胞的参数：1350psi 的可裂膜，26-28in Hg 的真空度，轰击距离6cm 。轰水稻愈伤组织的参数：1100psi 的可裂膜，26-28in Hg 的真空度，轰击距离9cm 。
按V AC 开关（上档）抽真空。当真空表读数为所需值时（27-28in Hg ），开关打到HOLD 开关处（下档）
然后按住FIRE 开关，当达到适当压力，可裂膜自动破裂后（可听见“啪”一声），松开FIRE 开关开关打到VENT 处（中间档），以释放轰击室内的真空（否则轰击室门打不开）
