基因枪的操作方法及注意事项

2021.11.17

　　一．基因枪的操作方法

　　1．材料准备

　　在9cm2培养皿上铺一薄层培养基，把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等)平铺于培养皿中心，直径在3cm范围内。

　　2．金粉的处理

　　取60mg金粉或钨粉置于离心管中，加入lml无水乙醇，充分振荡3min，以9615g离心1rain，去上清，再加入lml无菌水充分混匀后，以9615g离心，重复上述步骤3次。最后，将金粉悬浮于lml无菌蒸馏水中，置4‘C或室温下储存。

　　3．DNA的处理

　　取50tA金粉悬浮液，依次加入5rd的质粒DNA(1．0／lg～1)溶液、50／／l 0．1mol／L亚精胺(所用的溶液经无菌消毒)，振荡3rain后，在室温下放置10min，以9615g离心10s，弃去上清液；加入250~1无水乙醇，振荡后以9615g离心10s，弃上清液。沉淀重新悬浮于60／1l无水乙醇中，可供5枪(每枪10~1)使用。

　　4．基因枪的操作

　　基因枪的所有操作均在无菌条件下进行，具体步骤如下：

　　1)先用70％乙醇对基因枪表面及样品室进行消毒。同时，用70％乙醇将阻挡网和可裂圆片，微弹载体及其固定器、固定工具浸泡15min后，放在超净台上晾干。可裂膜片、固定盖、微弹载体发射装置可用70％乙醇进行表面灭菌，吹干。

　　2)将微粒载片嵌入固定环中，取DNA及金粉的混合物加于微粒载片中心，干燥lmin左右。

　　3)安装可裂膜于其托座上，顺时针拧到气体加速器上。

　　4)将空间环、阻挡网、阻挡网托座、微粒载片及固定环(带有微粒的面朝下)安装好，旋紧盖子，插入抢中。

　　5)把样品放在轰击室中，关好门。

　　6)打开氦气瓶的总阀，顺时针转氦气调节阀，使氦压表指针的示数高于可裂膜压力200Psi(＝1．379MPa)。

　　7)打开基因枪及变压器开关。

　　8)按动真空键，待真空度至26—28in Hg(＝88．05～94．82kPa)时，迅速按下Hold键，接着按住发射键(fire)，并保持不动，直到激发为止(听见砰地一声)，关掉发射键，关掉Hold键。

　　9)按通气键待真空表归零后，取出样品。

　　10)关机。把氦气瓶的总开关旋紧，打一次空枪，把氦压表指针归零后，再逆时针旋转氦压表调节阀；关闭基因枪的总开关及变压器开关。