药物鉴别--色谱鉴别法
色谱鉴别法
色谱鉴别法是指利用不同物质在不同的色谱条件下,比移值(Rf)或保留时间(tR)等是否一致来判定样品是否符合标准。因此,色谱法可用于多组分中的药物鉴别。
1.薄层色谱鉴别法
薄层色谱法鉴别原理为同一种药物在同样条件下的薄层色行为相同。一般采用对照品(或标准品)比较法,将供试品和对照品(或标准品)按药典规定,用同种溶剂配成同样浓度的溶液。在同一层板上点样、展开、显色,要求供试品斑点应与对照品(或标准品)斑点的位置(Rf)和颜色一致。薄层色谱法简单易行,适用于鉴别药物及其制剂的真伪;其应用范围日益扩大,特别是高效薄层色谱应用于中药鉴别方面。
在薄层色谱鉴别时需注意,点样基线距底边10～15mm,高效板一般基线离底边8～10mm。点样时小心,不要损伤薄层表面;点样的直径一般不大于3mm,高效板一般不大于2mm;点间距离可视斑点扩散情况调整,并保证相邻斑点互不干扰,一般不少于8mm,高效板供试品间隔不少于5mm。展开前如果需要溶剂蒸气预平衡,可在展开缸中加入适量的展开剂,密闭保持15～30min。溶剂蒸气预平衡后,迅速将点好供试品的薄层板放入展开缸中,进入展开剂的深度为距原点5mm为宜,展开剂不得没过原点,密闭,静置。除另有规定外,一般上行展开8～15cm,高效薄层板上行展开5～8cm。溶剂前沿达到规定的展距,取出薄层板,晾干,待检测。
供试品显色的方法:①含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视,也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色,或加热显色,在日光下检视。②有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在365nm紫外光灯下观察荧光色谱。③对于可见光下无色、但在紫外光下有吸收的成分可川荧光薄层板(如硅胶GF254板)检测,硅胶GF254板是在硅胶中掺入了少量荧光物质面制成的板,在254nm紫外灯下,整个薄层板呈黄绿色荧光,被测物质由于荧光猝火作用而呈现暗斑。
如葡萄糖酸钙鉴别项下要求“取本品50mg,加水5mL,温水浴溶解,滤过,取滤液作为供试品溶液。另取葡萄糖酸钙对照品,同法制成每1mL中含10mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙醇-水-浓氨溶液-乙酸乙酯(50:30:10:10)为展开剂,展开,晾干,置110℃加热20min后,放冷,喷以钼酸铵-硫酸铈试液(取钼酸铵2.5g,加1mol/L硫酸溶液50mL使溶解,再加硫酸铈1.0g,加1mol/L硫酸溶解并稀释至100mL,摇匀),再在110℃加热10min后,取出放冷,10min后检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同”。
2.高效液相色谱和气相色谱鉴别法
一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验,要求供试品和对照品色谱峰的保留时间(tR)一致。含量测定方法为内标法时,要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰的保留时间与内标物的保留试剂比值应相同。高效液相色谱和气相色谱鉴别法操作比较复杂,耗时长,一般在检查或含量测定项下已采用色谱法的情况下,才采用这两种方法做鉴别。
如紫杉醇鉴别项下要求“在含量测定项下的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致”。含量测定项下规定“取本品约12mg,精密称定,置100mL量瓶中,加乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图;另取紫杉醇对照品,同法测定。按外标法以峰面积计算,即得”。
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
