痘苗病毒储液制备——噬斑分析测定滴度
| 实验方法原理 | 经胰酶作用的系列稀释病毒储液常被用于感染适当的细胞系。经过几天的培养后，吸出培养基，将细胞用结晶紫染色。由于感染细胞变缩、变圆和脱落，形成直径 1～2 mm 颜色较淡的噬斑。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 胰酶消化汇片生长的单层 BSC-1 细胞（见「细胞培养实验」基本方案 1 步骤 4～7）。 2. 用血细胞计数器对细胞进行计数。 3. 将 5 × 105 个/孔 BSC-1 细胞加入 2 ml 完全 MEM-10 培养基在 6 孔的 35 mm2 组织培养板中培养，放入 5% CO2 加湿培养箱中 37°C 培养过夜，直到细胞生长至汇片。 4. 胰酶处理病毒储液（见基本方案 步骤 4）。 5. 用完全 MEM-2.5 培养基对胰酶处理后的病毒储液进行 9 次 10 倍系列稀释，注意每次稀释必须用新的吸管。 6. 吸出 BSC-1 细胞的培养基，用 0.5 ml 10-7、10-8、10-9 病毒稀释液感染细胞，每个稀释度感染两个孔。放入 CO2 培养箱中 37° C培养 1～2 h，每隔 15～30 min 轻轻摇动培养板，使病毒均匀分布，细胞保持潮湿。 7. 在每个孔中加入 2 ml 的完全 MEM-2.5 培养基，放入 CO2 培养箱中 37°C 培养 2 天。 8. 吸出培养基，每孔加入 0.5 ml 的 0.1% 结晶紫，室温下孵育 5 min。 9. 吸出结晶紫，使孔晾干。 10. 计算每孔中的噬斑数确定滴度，再乘以稀释倍数。 收起 |
| 注意事项 | 每孔中有 20～80 个噬斑一般可以取得较好的结果，在测定滴度时，可以考虑用胰酶对病毒储液进行 1:1 稀释。 |
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