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真核细胞利用DEAE-葡聚糖的转染实验

2019.3.26

用小鼠L型成纤维细胞来进行条件优比的,但只需稍做修改即可适用于几乎任何细胞。根据所研究的细胞类型进行方法优化十分关键。

实验材料

DNA

试剂、试剂盒

TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS

仪器、耗材

培养箱离心管

实验步骤

1.  接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿,培养3天至30%~50%汇片。

 

2.  对每个待转染培养皿,用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA,在组织培养橱中晾干沉淀,重悬于40 μl TBS中。

3.  吸去培养液,用10 ml 1×PBS洗涤培养皿,再用4 ml 完全DMEM-10NS洗1次。

 


 

4.  将DNA缓慢地(同时不断晃动试管)加入80 μl 预热的10 mg/ml DEAE-葡聚糖/TBS中。用200 μl 的移液器逐滴加120 μl DNA/DEAE-葡聚糖至每个培养皿中,使其均匀地覆盖整个培养皿表面,轻轻旋动使之均匀一致,直到获得一致的红颜色。在加湿的CO2培养箱中培养4 h(对某些类型的细胞可短一些)。

 


5.  从培养血中吸去含DNA/DEAE-葡聚糖的培养液。加5 ml 10%DMSO/PBS冲击细胞。室温下放置1 min,吸去DMSO,用5 ml 1×PBS洗1次,吸去毎个培养皿中加10 ml 完全培养液。

6.  培养细胞,在适当的时同进行分析。


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