真核细胞利用DEAE-葡聚糖的转染实验
基本方案
| 实验材料 | DNA |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | TBS DMEM 葡聚糖 DMSO PBS |
| 仪器、耗材 | 培养箱 离心管 |
| 实验步骤 |
1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。
2. 对每个待转染培养皿，用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA，在组织培养橱中晾干沉淀，重悬于40 μl TBS中。
4. 将DNA缓慢地（同时不断晃动试管）加入80 μl 预热的10 mg/ml DEAE-葡聚糖/TBS中。用200 μl 的移液器逐滴加120 μl DNA/DEAE-葡聚糖至每个培养皿中，使其均匀地覆盖整个培养皿表面，轻轻旋动使之均匀一致，直到获得一致的红颜色。在加湿的CO2培养箱中培养4 h（对某些类型的细胞可短一些）。
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