在小规模的SFC纯化中使用ELSD触发馏份收集的可行性 一
Jacquelyn Cole and Rui Chen
TharSFC, a Waters Company, Pittsburgh, Pennsylvania, USA.
引言
当比较HPLC和SFC的多项应用时，有人发现SFC因超临界液体的低粘滞度和高扩散率而能提供更好的选择性和更短的分析时间。
SFC用于制备模式时可显著降低成本，这是因为馏份通常收集在较小体积的挥发性醇中而由此减少了相当多的纯化后续工作。乙腈（ACN）的持续短缺也促使多个行业对SFC在分析和纯化方面能否替代乙腈依赖性反相液相色谱（RPLC）进行评价。现在，科学家在探寻、企业也在开发更多适用于SFC的包括UV、FID、MS和ELSD在内的检测器。
蒸发光散射检测器（ELSD）最初为高效液相色谱（HPLC）进行基于质量的非挥发性化合物检测而设计1。因为这种检测机制不依赖于化合物的光学属性，所以ELSD被认为是一种通用检测器，特别适用于检测不存在紫外光发色团的分析物。很多制药实验室和化学实验室将ELSD与紫外检测和质谱（MS）同时使用，以确保用于对组成各异或比较复杂的混合化合物进行色谱分析的通用检测的“真实性”。ELSD也被发现可广泛用于包括膳食补充剂、运动营养品、维生素、有机食品、饮料、化妆品和美容产品在内的天然产品的分析和纯化。
我们曾报告过使用SFC ELSD分析运动饮料中甜味剂的个案研究2以及对SFC ELSD试验参数所进行的详细评价3，这两项研究均采用分析规模。我们在此呈现关于ELSD用于小规模制备型SFC的可行性研究。我们希望此处所述的结果能促进专业人员将ELSD并入涉及分析和制备规模SFC的日常工作流程中。
试验
材料
酮洛芬和对乙酰氨基酚购自西格玛奥德里奇公司（美国密苏里州圣路易斯市）。将酮洛芬和对乙酰氨基酚溶解于HPLC级甲醇中，制得用于分析试验的0.5 mg/mL储备液和用于纯化的5 mg/mL储备液。硅胶柱（分析型：4.6 x 250 mm，填充5 μm颗粒；制备型：10 x 250 mm，填充6 μm颗粒）购自普林斯顿色谱仪器公司（美国新泽西州普林斯顿）。
色谱分析
各项试验均使用配备沃特世2998型光电二极管阵列（PDA）检测器和沃特世ELSD（美国马萨诸塞州米尔福德）的一台SFC Investigator II仪器（沃特世子公司T harSFC，美国宾夕法尼亚州匹兹堡）进行。
ELSD信号（模拟信号输出）通过模数转换器传输到SuperChrom软件。一个10 μL的定量环用于各次分析型进样，而一个200 μL的定量环则用于各次制备型进样。ELSD使用一根内径0.010英寸的不锈钢三通和25 μ x50 cm的PeekSil管在PDA和反压调节器之间分流出来。分析型方法在流速为4 mL/分钟（85:15 CO2/甲醇）、反压为150巴和温度为40˚C的条件下运行。分析型方法的ELSD条件设置如下：增益=1000、喷雾器温度= 45˚C、管道温度= 45˚C、压力= 30 psi。制备型方法在流速为10 mL/分钟（80:20 CO2/甲醇）、反压为150巴和温度为40˚C的条件下运行。ELSD条件设置如下：增益=1000、喷雾器温度= 28 ˚C、管道温度= 50 ˚C、压力= 60 psi。收集装置上的补偿泵被设置为每分钟用泵抽吸2 mL甲醇。对于纯化应用，以200μL的进样量连续进样五次，或者说每种化合物进样1 mg（两种化合物共2 mg），那么每种化合物的进样总量为5mg（两种化合物共10 mg）。
