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霍乱弧菌检测的检查过程

2023.3.13

  (1)、增菌

  称取检样25g,加入装有225mL碱性蛋白胨水(APW)的广口瓶内。固体样品应以均质器9000r/min-10000r/min打碎,或以剪刀充分剪碎。(36±1)℃培养6h-8h和16h-24h。

  如为牡蛎样品,应同样制备另一份检样,置于APW中,42℃培养6h-8h和16h-24h。

  (2)、分离

  以3mm-5mm接种环取6h-8h和16h-24h增菌培养液的表面生长物一环分别划线家终于TCBS琼脂平板至少各一个,于(36±1)℃培养18-24h。

  在TCBS琼脂上,典型的霍乱弧菌菌落为大的,光滑,黄色,稍平,具有不透明中心和半透明的边缘。

  (3)、初步鉴定

  ① 用接种环挑取TCBS琼脂平板上2-5个可疑菌落,划线于T1N1琼脂平板上,(36±1)℃培养12h-18h。

  ② 以无菌白色滤纸沾取T1N1琼脂表面培养物,滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。

  ③ 以无菌环取氧化酶阳性的培养物于0.5%去氧胆酸钠液试剂滴中,进行粘丝试验。

  ④ 以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物,接种TSI、KIA和AGS,穿刺底层并划线斜面。

  ⑤ 以接种针取上项相同培养物接种T1N0和T1N3肉汤。

  ⑥ 将TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉汤于(36±1)℃培养18h-24h。

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