霍乱弧菌检测的注意事项及检查过程
注意事项
检查时:
(1)、采集时请避免挖取沾到马桶内尿液及自来水的部分;同时也请勿将粪便直接置于卫生纸或擦手纸上。
(2)、为避免干扰检验结果,请勿使用棉花棒挖取。
(3)、粪便采集量请勿过少,以避免无足够的检体以供检验。
(4)、若需要以化学法检测粪便潜血时,请于采集前三天避免进食红肉、肝脏及菠菜、甘蓝、花椰菜等食物,以避免造成伪阳性结果。
(5)、若是以免疫法检测粪便潜血时,您不需要限制饮食种类。
(6)、因为婴幼儿不容易一次取到足量的检体,若需要分次收集时,请将检体暂时置于冰箱冷藏保存,以避免细菌滋生。
不适宜人群:
没有霍乱症状的人
检查过程
(1)、增菌
称取检样25g,加入装有225mL碱性蛋白胨水(APW)的广口瓶内。固体样品应以均质器9000r/min-10000r/min打碎,或以剪刀充分剪碎。(36±1)℃培养6h-8h和16h-24h。
如为牡蛎样品,应同样制备另一份检样,置于APW中,42℃培养6h-8h和16h-24h。
(2)、分离
以3mm-5mm接种环取6h-8h和16h-24h增菌培养液的表面生长物一环分别划线家终于TCBS琼脂平板至少各一个,于(36±1)℃培养18-24h。
在TCBS琼脂上,典型的霍乱弧菌菌落为大的,光滑,黄色,稍平,具有不透明中心和半透明的边缘。
(3)、初步鉴定
① 用接种环挑取TCBS琼脂平板上2-5个可疑菌落,划线于T1N1琼脂平板上,(36±1)℃培养12h-18h。
② 以无菌白色滤纸沾取T1N1琼脂表面培养物,滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。
③ 以无菌环取氧化酶阳性的培养物于0.5%去氧胆酸钠液试剂滴中,进行粘丝试验。
④ 以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物,接种TSI、KIA和AGS,穿刺底层并划线斜面。
⑤ 以接种针取上项相同培养物接种T1N0和T1N3肉汤。
⑥ 将TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉汤于(36±1)℃培养18h-24h。