jaffe反应
一、肌酐检测中可能有的问题
1、肌酐的碱性苦味酸法的反应原理是什么？
2、目前检测肌酐的分析大致上有几个方法？
3、从上世纪50年代起，推出的自动化肌酐检测方法，与以往相比有什么不同？
4、促使罗氏推出苦味酸补偿法的原因是什么？
5、补偿肌酐苦味酸法的含义是什么？
5、肌酐酶法的原理是什么？
6、今天如何叙述肌酐检测的溯源性？
7、罗氏的补偿肌酐结果可否直接与酶法肌酐结果比较？
二、肌酐的碱性苦味酸法的反应原理是什么？
Jaffe在1886年观察到在碱性条件下肌酐与苦味酸反应形成红色，该反应以他名字任命，已经经历了130年检测的历史。1904年，Folin应用Jaffe反应检测尿液的肌酐。可是，从Folin应用起，至今还没有弄清楚：究竟肌酐与碱性苦味酸是怎样反应的！即：肌酐的Jaffe反应只是一个现象的描述，不是什么反应原理！所以，肌酐的Jaffe反应没有检测原理。
从Folin开始，推出的Jaffe肌酐反应，使用了全血标本，经钨酸试剂去除蛋白后，以无蛋白血滤液参与反应的。因为如此的前处理，无蛋白血滤液去除了血液中的所有蛋白，再进行Jaffe反应时，肌酐受到现今那样的蛋白干扰大致上是没有的！因此，在很长时间里，以样品的无蛋白血滤液进行的肌酐测定是肌酐的“参考方法”。今天的肌酐检测中，遇到的所谓“假性肌酐”的色素问题是自动化要求肌酐直接检测引入的！
三、目前检测肌酐的分析大致上有几个方法？
答：环绕克服干扰问题，肌酐检测的方法学从历史上开始大致上可以分为：
Folin的去蛋白Jaffe反应检测；
1960年代起不除蛋白的Jaffe直接检测终点法；
Jaffe速率法（未补偿Jaffe方法）；
Jaffe速率法（补偿Jaffe方法）；
采用系列酶的比色法（酶法，以罗氏产品为代表）；
强生干片酶法等（干片酶法）。
四、从上世纪50年代起，推出的自动化肌酐检测方法，与以往相比有什么不同？
答：先打个比方，以往早餐吃豆浆是一定要处理黄豆，将黄豆浸泡、磨成浆、分离去除豆渣、煮沸豆浆后饮用。经典肌酐碱性苦味酸方法是，必须将肌酐从样品中分离（这是当时检验条件很差之故），然后在加入碱性苦味酸反应、比色测定。今天家用的豆浆机，实际上是将浸泡的黄豆一起打碎后，不过滤直接煮沸后，就吃了！这表面上看起来像一杯豆浆，其实是混合物。
自动化要求推动直接使用样品。临床实验室依然必须检测肌酐！但是检测的样品是肌酐在内的一个复杂混合体！即需要直接采用血清或血浆的肌酐Jaffe反应方法。为了可直接检测，不出现因蛋白存在产生沉淀，可用即可，为此调整碱性苦味酸内各个组分的用量、以及调整样品和试剂的比例等。为了避免出现蛋白沉淀，也使用了表面活性剂，但自动化初期阶段还是Jaffe反应的终点法。
很快就认识到样品中的蛋白为主的非肌酐组分，对肌酐结果影响很大。出现了使用以血清为基础的校准品，作为肌酐克服基质效应的措施出现了，开始研究Jaffe反应过程，确定肌酐与碱性苦味酸反应很快，干扰作用反应则慢得多，提出反应初期的Jaffe反应速率法检测肌酐。这应该是现今依然被广泛使用的分析仪上的肌酐Jaffe反应的检测方法基础。
现今的直接肌酐Jaffe反应检测，所有的检测方法全部为反应初期的速率法。大多采用了以血清为基础的校准品，都采用或宣称SRM 914a为原始第一标准，对报告结果不做任何数学处理（即为非补偿Jaffe方法）。所有现今的碱性苦味酸检测方法，均宣称：反应线性良好，是速率法，可溯源至SRM914a，与其他公司产品具有良好的相关等。
五、促使罗氏推出苦味酸补偿法的原因是什么？
答：1、酶法检测肌酐的推出，对临床实验室的肌酐检测是一个很关键的挑战。使用当今认可的核素稀释-质谱分析的参考方法，按照严格定值方案对多份新鲜病人样品赋予肌酐参考值；酶法通过这些血清的参考值，将可靠性传递给酶法专用的校准品。然后，肌酐酶法与ID-MS参考方法的直接比较，充分说明酶法是所有进入常规实验室的肌酐检测方法中最佳的。可是，肌酐酶法试剂价格与苦味酸方法相比要昂贵得多。因此，尽管在检测结果可靠性上，酶法结果被大家认可，但是全球的临床实验室依然在苦苦使用苦味酸方法的目的，还是要节约实验室的开支。因此，追求苦味酸方法的检测结果可靠，成为临床实验室永远的课题。
2、肌酐酶法在许多文献中，与各个Jaffe反应速率方法比较，都指出了现今的Jaffe反应速率方法非特异性的问题。由于所有现有的Jaffe反应速率法，直接使用人血清，出现的非特异性问题大多是样品中蛋白所致的“非肌酐色素”问题。与最早的去除蛋白后，再与碱性苦味酸反应具有的干扰不相似。因“非肌酐色素”使所有Jaffe反应的肌酐检测结果，明显高于酶法结果。如何使现有的Jaffe反应直接速率法也能够得到与酶法估计的eGFR一致?
3、通过室间质量评估比对、病人样品肌酐检测结果比对，罗氏公司率先提出，对现有的Jaffe反应直接速率法进行“补偿”，使肌酐检测结果的数值与酶法肌酐结果相近。为便于分类和理解，将直接Jaffe速率方法被给予补偿的方法，以下称为：补偿Jaffe方法。
