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基因枪介导pVax-Dsred-IRES-EGFP质粒转染体外培养细...(三)

2020.7.20

2讨论

 

基因枪技术, 又称为微粒轰击技术( Particle Bombardment Technology),其基本原理就是将外源基因包裹到比重较大而化学性质很稳定的微米级的金或钨上,然后用微粒加速装置打入靶细胞或组织。早期多用于在植物中转移基因。它通过提供给包裹有DNA的金颗粒很高的初速度,使其穿透植物的细胞壁,而达到质粒DNA有效的转移入细胞内的目的。随后,这项技术被应用于哺乳动物实验系统[10]。本实验所用的基因枪是依靠氦气提供给金颗粒很高的初速度,使其穿透靶细胞表面,将目的基因带入细胞。即使微颗粒被导入到细胞之间,作为异物的它们也可能诱导细胞产生吞噬作用,从而进一步增加外源基因进入细胞的概率。

非病毒基因递送系统是未来的发展方向,是现在基因治疗的热点研究内容, 基因枪作为一种纯物理的基因转移方法, 已成功地介导多种目地基因的体内外转移, 在肿瘤基因治疗中发挥着重要作用,基因枪技术在肿瘤基因治疗中必将发挥更大的作用。本试验研究可以说明国产新芝SJ-500型基因枪可以有效的转导外源基因,为小鼠肿瘤治疗模型的基因枪经皮免疫治疗奠定了坚实基础和可靠依据。目前报道较多的是美国BIO-RAD公司的Helios基因枪,而国产基因枪应用目前在国内报道很少,国产基因枪相对于进口枪,降低了科研成本,更加有利于推广。

而我们所使用的国产新芝SJ-500型手提式基因枪在转染体外培养的细胞系时,在使用过程中仍然发现一些不足之处,特别是转染效率尚不够高,这可能与金颗粒的大小,每颗子弹的携金量(MLQ)以及金颗粒上包裹的DNA量(DLR)、轰击枪数、轰击距离、轰击压力等诸多因素有关,还需要进一步进行研究和探索。


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