免疫荧光组织（细胞）化学技术：如何设置对照（直接...
免疫荧光组织（细胞）化学技术：如何设置对照（直接法、间接法
为了保证免疫荧光组织化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次试验时设置对照：
1、直接法
（1）标本自发荧光对照
标本只加PBS或缓冲甘油封片，荧光显微镜观察组织内如果有荧光，称为自发荧光。
（2）抑制试验
可分为一步方法和二步方法。
一步抑制方法：先将荧光抗体与过量未标记特异性抗体作等量混合，再加在标本上染色，结果应为阴性。
二步抑制方法：标本先加未标记的特异性抗体，水洗后再加标记荧光抗体，结果应呈阴性或明显减弱的荧光。
（3）阳性对照
用已知阳性标本做直接法免疫荧光组织化学染色，结果应呈阳性荧光。如对照1和2无荧光或弱荧光，3待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。
2、间接法
（1）自发荧光对照：同直接法。
（2）荧光抗体对照：标本只加间接荧光抗体染色，结果阴性。
（3）抑制试验：同直接法。
（4）阳性对照：同直接法。
结果：如对照（1）、（2）、（3）均呈阴性，阳性对照和待检标本呈阳性荧光则为特异性荧光。
3、补体法
（1）自发荧光对照
（2）荧光抗体对照
（3）抑制试验
（4）补体对照：取新鲜豚鼠血清1:10稀释，先作用于标本，洗后再用抗补体荧光抗体染色，结果阴性。
（5）抑制试验：标本加灭活的第一抗体，再加1:10稀释的新鲜豚鼠血清孵育后，再加未标记的抗补体血清与抗补体荧光抗体等量混合稀释液，结果应为阴性。
（6）阳性对照。
（1）~（5）结果阴性，（6）待检标本阳性时，则为特异性荧光。
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