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如何对qPCR数据进行统计分析

2022.8.17

如果避免了预扩增,数据可转换成绝对的cDNA数量,否则数据分析可以Cq值来开展,因为每个细胞的转录本水平呈对数正态分布。一开始,可以各种方法对数据作图,此外,基本的统计分析也应开展(如阳性细胞的数量、平均值和偏差)。细胞数量测定通常是以验证过的参考基因来均一化的。这种策略在单细胞分析中应避免,因为单个细胞中的所有转录本水平随时间变化。我们发现,校正分析和无监督算法(如Kohonen self-organizing maps)对定义亚群和基因网络很有用。Finn-Arne Weltzien(挪威兽医学院)
我们在利用单细胞qPCR进行定量测定时很小心。我们通常只进行定性分析。如果我们定量,我们会利用目的基因的拷贝数相对参考基因的拷贝数。Weiwen Zhang(亚利桑那州立大学,现在天津大学)
对于每个单细胞,我们对目的基因和参考基因进行qPCR分析,如原核生物的16s rRNA和真核生物的28s或actin。不过,我们也注意到,这些常用参考基因的表达水平在单细胞中也差别很大,对大量细胞qPCR的标准定量法则也须特别谨慎。在大部分情况下,我们报告原始和均一化的Ct值,并使用它们进行单细胞qPCR结果的定量。

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