分光光度法测定食品中甜蜜素
1)测定原理
在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯,与磺胺重氮化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料,在550nm波长处测其吸光度,与标准比较定量。
2)试剂
①三氯甲烷。
②甲醇。
③透析剂:称取0.5g二氯化汞和12.5g氯化钠于烧杯中,以0.01mol/L盐酸溶液定容至100mL。
④亚硝酸钠溶液 10g/L。
⑤硫酸溶液:100g/L。
⑥尿素溶液 100g/L,临用时新配或冰箱保存。
⑦盐酸溶液 100g/L。
⑧磺胺溶液 10g/L。称取1g磺胺溶于10%盐酸溶液中,最后定容至100mL。
⑨盐酸萘乙二胺溶液 1g/L。
⑩环己基氨基磺酸钠溶液 精确称取0.1000g环己基氨基磺酸钠,加水溶解,最后定容至100mL。此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠1mg。临用时将环基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍,此液每毫升含环已基氨基磺酸钠0.1mg。
3)仪器
分光光度计;漩涡混合器;离心机;透析纸。
4)试样处理
同气相色谱法。
5)操作方法
(1)提取
①液体试样 称取10.0g试样于透析纸中,加10mL透析剂,将透析纸口扎紧,放入盛有100mL水的200mL广口瓶内,加盖透析20～24h得透析液。
②固体试样 准确吸取10.0mL经处理后的试样提取液于透析纸中。
(2)测定
①取两支50mL带塞比色管,分别加入10mL透析液和10mL标准液,于0～3℃冰浴中,加入1mL10g/L亚硝酸钠溶液、1mL100g/L硫酸溶液,摇匀后放入冰水中不时摇动,放置1h。取出后加15mL三氯甲烷,置漩涡混合器上振动1min,静置后吸去上层清液,再加15mL水,振动1min,静置后吸去上层清液,加10mL100g/L尿素溶液、2mL100g/L盐酸溶液,再振动5min,静置后吸去上层清液,加15mL水,振动1min,静置后吸去上层清液,分别准确吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烷作参比管。于各管中加入15mL甲醇、1mL10g/L磺胺,置冰水中15min,取出恢复常温后加入1mL1g/L盐酸萘乙二胺溶液,加甲醇至刻度,在15～30℃下放置20～30min,用1cm比色杯于波长550nm处测定吸光度,测得吸光度A及AS。
②另取两支50mL带塞比色管,分别加入10mL水和10mL透析液,除不加10g/L亚硝酸钠外,其他按①项进行,测得吸光度As0及A0。
6)结果计算
式中 X——样品中环已基氨基磺酸钠的含量,g/kg;
m——样品质量,g;
V——透析液用量,mL;
c——标准管浓度,μg/mL;
As——标准液吸光度;
As0——水的吸光度;
A——试料透析液吸光度;
A——不加亚硝酸铀的试料透析液吸光度。
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