实验室分析仪器--紫外分光光度法测定食品中咖啡因
目前，测定咖啡因的方法有电化学法、光谱法、气相色谱法、液相色谱法等。而用紫外-分光光度法进行咖啡因测定，只需加入几种试剂来消除干扰，它与美国分析化学家协会（Association of Official Analytical Chemists，AOAC）的分析方法比较，操作更简便、快速、准确。
该方法的测定原理为：可可类食品中除咖啡因外，还含有可可碱等成分，茶叶中还含有酚类、没食子酸和叶绿素等成分，这些成分均可溶于水，当用二氯甲烷作萃取剂时只有咖啡因被萃取，经多次萃取后在277nm 处测定吸光度，即可求咖啡因的含量。利用咖啡因与其他物质在有机溶剂中的溶解性能不同加以分离提取，然后根据咖啡因对紫外光有强烈吸收，在一定含量范围内与吸光度成正比。
样品处理：取适量样品（含 CO2 的样品应预先加热赶气，固体不溶性样品应加水置沸水浴1h，并不断搅拌），磨碎于三角瓶中，加沸水75mL 在沸水浴中加热45min，趁热过滤于容量瓶中，洗涤2～3次，冷却后定容，吸取溶液10mL 于50mL 容量瓶中，加5mL 0.01mol/L 的盐酸溶液和1mL碱性乙酸铅溶液去除茶叶中重金属离子，用蒸馏水定容。移取上述溶液30mL 于50mL 分液漏斗中，每次用5.0mL 二氯甲烷萃取（共7次），合并萃取液定容至刻度。
测定：从二氯甲烷为溶剂的咖啡因储备液（c=500μg/mL）中分别移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、3.50mL 于50mL 容量瓶中，用二氯甲烷定容得系列标准液，在277nm处测定吸光度，同时将上述已处理好的样液在277nm 处测定吸光度，从工作曲线上即可求得茶叶中咖啡因的含量。
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