【分享】siRNA转染成功的主要关键
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素，细胞转染实验中经常会遇到siRNA转染，下面介绍一下siRNA转染成功的主要关键点。
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1.设计合成有效的siRNA
RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉 默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排 除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有效性。
2.合成的siRNA注意纯度和工作浓度
siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。
3.选择合适的siRNA转染试剂
选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大，可以直接影响实验结论和结果，所以一定选择低毒性的转染试剂，看一个转染试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要 求的细胞密度越大，说明毒性越大，比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。除了低毒性，还最好操作简便，越简单越好，比如有的转染试剂要 求转染前换无血清培养基或低血清培养基，转染后又要有血清培养基，实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响，最终影响实验的可靠性。
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