使用合成核苷酸作探针实验——在绿化四甲胺中(TMAC)杂交
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”介绍的方法处理已影印细菌菌落的滤膜。
3. 转印细菌菌落的滤膜按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”的步骤1洗膜,然后将滤膜浸入50℃ 2×SSC / 0.5%SDS / 50 mmol/l EDTA,pH8.0溶液中洗涤,尽可能冼去滤膜上影印的细菌残渣,然后用同洋的溶液再洗1遍。
4. 按每张滤膜5~10 ml 预温的TMAC杂交液量,在15 cm 玻璃水晶盘中可移入多达30 张的滤膜,用塑料保鲜膜将玻璃盘封好。
6. 预杂交后,将滤膜转移到一个装满新鲜、预热的TMAC杂交液的杂交容器中。
8. 室温下每张滤膜先用5~10 ml TMAC洗液洗涤,然后分别将滤膜转移到200~ 250 ml 新鲜的TMAC洗液中,轻轻振荡洗涤15 min。
9. 换上等体枳预热的TMAC冼膜液,在适当的洗膜温度下温育1 h。 |