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免疫酶标技术—PAP法过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物

2019.4.07


实验方法原理	PAP 的基本原量是在间接法的基础上，即在加完酶标二抗以后，再加一个PAP 复合物（过氧化物酶一抗过氧化物酶抗体复合物）。PAP 复合物为由3 个酶分子和2个抗酶抗体亚单位构成的复环形复合物，其稳定性很强，冲洗时不会脱落。在这种方法中，PAP 复合物中的抗酶抗体与特异性一抗必须来自同一种属动物。其优点是比间接法更为灵敏，而且背景染色体。
实验材料	抗体
试剂、试剂盒	PBS H2O2 血清 DAB 苏木精
仪器、耗材	显微镜
实验步骤	1. 标本固定后，PBS洗涤； 2. 1 %H₂O₂（或1 %H₂O₂甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟； 3. PBS洗2×3 分钟； 4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟； 5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜； 6. PBS洗3×3 分钟； 7. 滴加二抗，室温30 分钟；

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