血清肌钙蛋白i(tni)和肌钙蛋白t(tnt)的注意事项及检查过程
注意事项
1、心肌钙蛋白T、I的快速检测:
(1)试纸条只能用1次,重复使用无效。
(2)试纸条试验区和对照区均不出现色带,取另一试纸条重复检测仍无结果,则表示试纸条失效。
(3)免疫层析技术测定CTnT、CTnI适合床边快速试验,但只是定性或半定量,要真正了解病情严重程度及选择治疗措施还需定量测定。
2、心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
(1)CTnT待测标本最好用血清,不要用抗凝血浆,因为抗凝剂如:肝素、EDTA等对CTnT有影响。
(2)由于CTnT是心肌细胞损伤释放出来的,所以尽量避免标本溶血,如果标本溶血很可能造成检测结果增高。
(3)配制好孵育液不要冷冻保存,应放在2~8℃冷藏。
(4)实验前应注意试剂有无失效,如变质,其颜色加深。
(5)为了提高CTnT检测的可靠性,应注意加样的准确及其他操作过程,比色最好选用双波长。
检查过程
1、心肌钙蛋白T、I的快速检测:
(1)将包装纸打开,标记上样品编号。
(2)加5~6滴血清样品到样品槽中。
(3)在10~15min内观察色带出现情况。
2、心肌钙蛋白T的ELISA法测定:
(1)在包被板中分别加入标准血清,对照血清和病人标本于相应的孔内各50μl。
(2)每孔各加孵育缓冲液50μl,并轻轻混匀。
(3)室温下孵育60min后洗涤三次,10min内完成。在吸水纸上用力拍打微孔。以除去残留水滴。
(4)每孔各加入酶结合物100μl,轻轻混匀。
(5)倒空微孔板中的孵育液,用洗涤液将微孔洗三次,在吸水纸上用力拍打微孔,以除去残留水滴。
(6)将200μl色原底物溶液加入相应的孔中,避光,轻轻混匀,静置30min。
(7)用酶标仪在10min内,于405nm和630nm双波长下测定吸光度值(OD值)。