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液质联用快速灵敏测定肉、血浆和牛奶中的多类兽药残留 4

2020.5.18

在以保留时间进行全扫描识别的分析中，TraceFinder处理软件为组分检测提供很高的选择性（使用 5 ppm的窄提取窗口）。该软件还提供另外三种自动定性确证方式。第一种方式是通过全扫描中母离子的同位素信息进行确证。图5为环丙沙星实测（红色）和理论（蓝色）的同位素分布叠加图。将分辨率设定为70,000，即使在如肌肉提取物的复杂基质中，某个化合物的浓度低至5ppb，其同位素分布的匹配仍不受干扰，确保了定性结果的可靠性。

第二种方式是通过MS/MS数据检测已知碎片离子进行定性确证。以下结果为0.5ppb肌肉组织加标样的检测结果。图6为vDIA模式下碎片离子确证的结果。由于vDIA谱图采用一个宽隔离窗口生成，因此可以检测多个母离子产生的碎片离子。Orbitrap MS/MS具备的高分辨率和高质量精度特性，使得碎片离子的选择性识别成为可能，结合保留时间，可获得可靠的确证结果。

图5. 环丙沙星的同位素谱图匹配，红色为实测谱图，蓝色为理论同位素分布图

图6. 环丙沙星的碎片匹配结果，红色为实测谱图，蓝色为确证碎片离子质量数

大多数常规方法能够分析的目标化合物数量有限。因此，对候选药物进行“后质谱分析”的再分析能力，有利于节省仪器/实验时间和样品。为了演示数据文件的回顾性分析，对肌肉组织加标样品的vDIA数据文件进行宽范围筛查。利用内置的1500种化合物数据库进行未知物筛查，结果发现，数据库中的部分结果与样品中出现的其他组分高度匹配。图7以皮质醇（氢化可的松）为例，展示了通过同位素匹配、碎片搜索和谱库匹配得到的确证结果。

结论

本文利用Q Exactive Focus MS和UltiMate 3000 HPLC，建立了用于44个不同种类兽药残留筛查定量的可变数据非依赖采集方法。该新方法满足所需的LOD灵敏度，并且能够根据保留时间、精确m/z、同位素比和碎片离子等进行定性确认，性能优于欧盟的法规要求（EC/657/2002）。vDIA为非目标化合物和未知物的筛查确证提供了一种新方法，具备高灵敏度和高选择性。TraceFinder软件简单易用，可应用在化合物识别和定性确证的全过程。vDIA方法达到了预期目标，能够准确而灵敏地检测非目标化合物（例如，44种组分列表中的物质），并能对未知化合物进行回顾性分析筛查。