碱水解和由二吲哚碳酰的活化实验
基本方案
| 实验方法原理 | |
|---|---|
| 实验材料 | 酶溶液 |
| 试剂、试剂盒 | 磷酸钾 NaCl NaOH 二氧杂环乙烷 羰基二咪唑 |
| 仪器、耗材 | 吸滤器 聚酯小片 |
| 实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 1. 碱解和活化 聚酯小片（每片 2 cm2，10 片）在 10 ml 10％（质量浓度）NaOH 中室温孵育 10 min。用水冲洗五次，每次 10 ml，之后浸没在二氧杂环乙烷中 30 min，然后用二氧杂环乙烷冲洗五次以去除残留的水。其后，聚酯小片在溶有 35 g/l 羰基二咪唑的二氧杂环乙烷中孵育 30 min。最终用二氧杂环乙烷冲洗五次、用 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾冲洗三次。 2. 酶的偶联 聚酯小片浸没在 10 ml 的酶溶液中，在室温过夜孵育，对于敏感的酶在 4℃ 孵育。在吸滤器上先用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾冲洗，再用 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾冲洗，以去除未结合的酶。聚酯小片能在缓冲液中 4℃下储存一周。为了储存更长时间，必须用水短暂冲洗这些聚酯小片后在空气中干燥（不推荐在敏感的酶中使用）。
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| 注意事项 | |
| 其他 |
试剂： 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸钾 溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.5 100 g/l NaOH 二氧杂环乙烷 溶有 35 g/l 羰基二咪唑（CDI，Mr＝162.2）的二氧杂环乙烷
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