β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检查过程
1.对硝基酚比色法混合,在405nm波长,1cm光径,蒸馏水调零,读取各管吸光度,用(AU-AC)之差查标准曲线。
①基质对硝基酚应纯化,配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L浓度,用窄带宽分光光度计扫描吸收曲线,λmax=401nm,根据IFCC标准,Aλmax=0.7316~0.7388,Eλmax=18380±90(25℃)。根据对硝基酚的摩尔吸光系数
②底物溶解度小,配制时应先用适量pH 4.6缓冲液调成糊状,再逐渐加缓冲液至所需量。
③测定结果超线性范围时,应将标本用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
④尿酶浓度受尿量影响较大,应留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值计算酶排出率,即不受尿浓缩或稀释的影响,又不需留24h尿。
2.荧光光度法:先将血清或尿用不含牛血清白蛋白(BSA)的缓冲液作20倍稀释,
混匀,激发波长364nm,发射波长448nm,以终止液调零,6μmol/L 4-MU管调荧光强度至100后,分别测空白管及测定管的荧光强度。
①荧光法测NAG已有国产试剂盒,其敏感度高,不受尿色干扰。
②也可用上海第三分析仪器厂产930荧光光度计,激发滤光片360,发射滤光片用(400450)复合,效果满意。
③本法酶反应液中各成分浓度为:底物1.33mmol/L,枸橼酸20mmol/L,Na2HPO432mmol/L。
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