蛋白质回收实验
基本方案
| 实验材料 | 蛋白质 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | SDS DTT 脱色液 染色液 |
| 仪器、耗材 | 电泳仪 透析膜 |
| 实验步骤 |
1. 凝胶浸泡在染色液中于室温缓慢摇动染色15~20 min，然后移至脱色液中于4℃温和摇动下脱色2~3 h。
3. 用一园片状的Spectrapor 6透析膜将电洗脱仪的洗脱池的底端盖好，并拧紧帽子
5. 将洗脱室置于洗脱池之内，加入洗脱液至仅高于各电极槽的排液出口， 将其余的液体加入小混合池中。
6. 连接双通道蠕动泵，调整流速使溶液能缓馒地从混合池中滴回洗脱池。用弯头巴斯德吸管吸去洗脱室透析膜下的所有气泡，小心不要戳穿透析膜。
7. 将凝胶碎片浸泡3~5 h。连接电极，注意将阴极连接于冼脱室有凝胶碎片的一侧。50 V 恒压12~16 h。
8. 关电源，撤去与电极的连接，以透析液代替洗脱罐中的冼脱液。重新连接电极，在80 V 恒压下12〜24、
9. 关电源，撤去与电极的连接，关闭蠕动泵。从罐中取出洗脱室，吸去含洗脱蛋白的收集池中蓝色蛋白层上面的缓冲液，以带平嘴针头的50 μl 注射器混匀剩余的含蛋白液体。
10. 将蛋白溶液移入一微量离心管中，用50 μl 透析液洗收集池，并合并于蛋白液。
11. 在Speedvac蒸发器中冻干液体，样品可在-20℃保存。
13. 取5%~10%样品用Laemmli凝胶系统的微型胶分折蛋白冼脱的程度、分子量和回收率，蛋白质可用考马斯亮蓝或银染法检测。
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