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蛋白酶的测定实验——偶氮酪蛋白测定法

2019.3.31
实验方法原理酪蛋白的敏感性鉴定可以通过这个实验得到很大程度的改善。含氮的基团与酪蛋白的共价键被蛋白水解时切断,用 TCA 上清液测定它们的颜色变化。
实验材料

蛋白酶溶液

试剂、试剂盒

磷酸钾偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)三氯乙酸

仪器、耗材

分光光度计

实验步骤


0.5 ml 偶氮酪蛋白溶液


0.2 ml 蛋白酶溶液


25℃ 时培养 30 min 后,加 0.2 ml 10% 三氯乙酸停止反应,离心 5 min。


于 340 nm 处测上清液的吸收值,1U 是指 1 h 内,能使吸收值变化 1 的酶量。

注意事项
其他


试剂:


0.1 mol/L 磷酸钾,pH 8.0


0.2% 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)溶于 0.1 mol/L 磷酸钾溶液,pH 8.0


10% 三氯乙酸(TCA,质量浓度)


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