质粒DNA导入细菌细胞实验
CaCl2转化法
一步法制备和转化感受态细菌实验
电转化法
实验材料 | 菌落 质粒DNA |
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试剂、试剂盒 | CaCl2 |
仪器、耗材 | 培养基 平板 |
实验步骤 |
1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中,于37°C中速摇床培养过夜(250 r/min)。 这一步的目的是使细菌快速生长(对数早期或中期)。 将合适体积的转化物(1、10和25 μl)涂于含有氨苄青霉素的LB平板上,37 °C培养过夜。 转化的大肠杆菌MC1061和DH1细胞一般可以产生105~108克隆数/μg DNA。
对氨苄青霉素来说,最适宜的密度是每个平板上的细胞≤500,这样是为了防止弱抗性的卫星菌落的生长。
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注意事项 |
1. 所有与细菌接触的物品和液体都应该是无菌的。
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