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火箭电泳实验

2020.8.17

实验方法原理 在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。

实验材料 待检血清

试剂、试剂盒 巴比妥缓冲液琼脂粉

仪器、耗材 微量进样器打孔器玻璃板电泳仪

实验步骤

1.  抗体琼脂板的制备:同单向扩散法,但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05 M 的巴比妥缓冲液。

2.  打孔见下图

3.  将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原(人血清)分别加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量准确而不外溢。

4.  把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳,电压4~6伏/厘米,电泳时间1~5小时,直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线,关闭电源。

5.  取下琼脂板,以抗原孔中心为起点,量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线,查出待检血清中Ig含量。


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