核酸扩增—环介导的等温扩增法
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Research（核酸研究）杂志上公开了一种新的适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，即环介导等温扩增技术，英文名称为“Loop-mediated isothermal amplification"，受到了世卫组织、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中。通过推广，环介导等温扩增技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。该技术的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，环介导等温扩增反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。 环介导等温扩增方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60 min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于反应管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30～60 min，肉眼观察结果）。 环介导等温扩增方法缺点：灵敏度高，÷旦开盖容易形成气溶胶污染，力Ⅱ上目前国内大多数实验室不能严格分区，假阳性问题比较严重。引物设计要求比较高，有些疾病的基因可能不适合使用环介导等温扩增方法。
推荐
