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核酸扩增—链置换扩增技术(SDA)

2021.5.12

  SDA是一种基于酶促反应的DNA体外等温扩增技术,采用标记的两种不同荧光基团的探针。在SDA过程中,该探针被掺入到双链扩增产物中,由限制内切酶的酶切使淬灭基团与荧光基团分开,从而释放荧光,用荧光偏振检测法定量检测。SDA较之PCR有更高的扩增效率,耗时仅30min。其基本系统包括一种限制性核酸内切酶、一种具有链置换活性的DNA聚合酶、两对引物、dNTPs以及钙、镁离子和缓冲系统。基本过程包括准备单链DNA模板、生成两端带酶切位点的目的DNA片段、SDA循环三个阶段。 SDA技术同样具有较高的敏感性和特异性,但由于扩增时间和模板DNA浓度的影响可能会出现非特异性扩增产物的累积,因此需要利用热稳定机制优化其扩增条件。

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