单克隆抗体技术的方法--克隆化操作过程
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞,可能来源于二个或多个杂交瘤细胞,因此它们所分泌的抗体是不同质的。为了得到完全同质的单克隆抗体,必须对杂交瘤细胞进 行克隆化。
另一方面,杂交瘤细胞培养的初期是不稳定的,有的细胞丢失部分染色体,可能丧失产生抗体的能力。
为了除去这部分已不再分泌抗体的细胞,得到分泌 抗体稳定的单克隆杂交瘤细胞系(又称亚克隆),也需要克隆化。
另外,长期液氮冻存的杂交瘤细胞,复苏后其分泌抗体的功能仍有可能丢失,因此也应作克隆化, 以检测抗体分泌情况。
通常在得到针对预定抗原的杂交瘤以后需连续进行2-3次克隆化,有时还需进行多次。
所谓克隆化是指使单个细胞无性繁殖而获得该细胞团 体的整个培养过程。克隆化的方法很多,如有限稀释法、软琼脂法、单细胞显微操作法、单克隆细胞集团显微操作法和荧光激活细胞分类仪(FACS)分离法。
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