EHF ELISA Kit使用说明
此酶免试剂盒可用于流行性出血热(EHF)病人血清中抗汉坦病毒IgG和IgM的定性检测。
前言简介
流行性出血热(EHF)又称肾病综合征出血热(HFRS)，是由汉坦病毒(Hantaan
type)引起的。与流行性肾病相比(因近距离接触普马拉病毒而被传染)，HFRS的传染性更严重，一般都会伴随有尿毒症、呼吸麻痹和伴随有典型休克综合症的出血，甚至死亡。这种疾病起初的症状是流行性感冒样症状。HFRS起初的典型症状是血小板减少症和白细胞增多症。汉坦病毒主要分布于亚洲和巴尔干各邦地区，通过直接接触啮齿动物、啮齿动物的排泄物或分泌物而传染给人。士兵、农民和露营者都特别容易受到危险。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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实验原理
包被孔中包被了重组的汉滩型汉坦病毒核壳体蛋白。在检测IgM抗体时，为了避免由IgG抗体或类风湿因子引起的非特异性因素的干扰，病人血清必须与类风湿因子IgG吸附剂一起孵育。
实验过程孵育期间，抗重组汉坦病毒抗原的特异性抗体会结合到固相包被板上。洗板后，我们分别用过氧化酶标记的抗人IgG和IgM抗体检测特异性的IgG和IgM。加入底物液后显色，溶液所显示的颜色强度与结合的抗体量成正比。之后用酶标仪读取OD值。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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贮存及稳定性
试剂盒应当在2~8℃运输和储存，避免高温和阳光直射，没有打开的试剂能保存到有效期。包被条在封闭的袋子内2~8℃能保存到有效期。准备好的试剂的储存及其稳定性在相应章节已阐明。
开封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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样品采集和贮存EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
人血清EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
注意静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集到血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸的和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。此试验要采用人血清样本 | |||
储存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | 避免热源和太阳直射，避免反复冻溶。 |
稳定性 | 5天 | 12mon |
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试剂盒成分EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
规格 | 符号 | 成分 |
1 x 12 x 8 | MTP | 微孔反应板 |
1 x 750 µL | ANTI IgG CONJ CONC | 酶联物(20倍浓缩) |
1 x 750 µL | ANTI IgM CONJ CONC | 酶联物(20倍浓缩) |
1 x 1.5 mL | CONTROL + IgG | 阳性质控IgG |
1 x 1.5 mL | REFCONTROL IgG | 参考对照质控IgG |
1 x 1.5 mL | CONTROL + IgM | 阳性质控IgM |
1 x 15 mL | DILBUF CONC | 样品稀释缓冲液(20倍浓缩) |
1 x 1.5 mL | REFCONTROL IgM | 参考对照质控IgM |
1 x 1.9 mL | CONTROL- | 阴性质控 |
1 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗涤液(10倍浓缩) |
1 x 1.5 mL | RE-AB | 类风湿因子吸附剂 |
1 x 12 mL | TMB SUBS | TMB底物液 |
1 x 12 mL | TMB STOP | TMB终止液 |
1 x | FOIL | 胶粘薄膜 |
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实验做需器材但试剂盒没提供EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
1、精确微移液管 体积(5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL)
2、涡旋混合器
3、保温箱, 37°C
4、试管(用于样品稀释)
5、8道微量移液器
6、洗瓶,自动或半自动洗板机
7、酶标仪
8、双蒸水或去离子水
9、吸水纸,吸嘴,计时器
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实验前准备EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
实验前将试剂盒平衡至室温(18-25°C).含结晶的缓冲浓缩液可在37°C下迅速将其溶解.实验前将其冷却至至室温(18-25°C)
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稀释浓宿成分的准备(以测32孔为例)EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
提示:实验前取所需量试剂,并迅速用于稀释.
浓缩液 | 组分 | 体积 | 稀释液 | 比例 | 备注 | 存储 | 稳定性 |
3mL | DILBUF CONC | 57mL | 去离子水 | 1:20 | 充分混匀 | 2-8°C | 1周 |
10 mL | WASHBUF CONC | 90 mL | 去离子水 | 1:10 | 充分混匀 | 2-8°C | 8周 |
200 µL | ANTI IgG CONJ CONC | 3.8 mL | 稀释洗涤液 | 1:20 | 充分混匀 | - | 实验结束后倒掉 |
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样品稀释EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
稀释 | 比例 | 备注 | 稳定性 | |||
IgG样品 | 常规 | 稀释样品稀释液 | 1:201 | 10 µL+2000 µL | 2-8°C | 6周 |
IgM样品 | 常规 | 稀释样品稀释液 | 1:201 | 10 µL+2000 µL | 2-8°C | 6周 |
提示:未稀释样品可于-20°C下保持数月
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实验步骤EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
1.将100μl即用型阳性质控、阴性质控、参考对照质控和稀释血清样品(如是IgM样品,需用类风湿因子吸附剂前处理)加入到相应的微孔中。
2.胶粘薄膜盖板，37℃下温育45分钟。
3.移除胶粘薄膜, 弃除孔内反应液.每孔加入300μl稀释洗涤液，重复洗板4次，在吸水纸上拍干去除残留液滴。
4.每孔中加入100μl稀释酶联物(IgG 或IgM)
5.胶粘薄膜盖板。37℃下温育45分钟.
6.移除胶粘薄膜, 弃除孔内反应液.每孔加入300μl稀释洗涤液，重复洗板4次，在吸水纸上拍干去除残留液滴。
7.加底物液和终止液,建议用8道微移液器,保证加液相等的时间间隔。避免产生气泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室温(18-25°C)温育10分钟
10.每孔中加入100μl终止液终止底物液反应。
11.20分钟内于酶标仪450nm处读取OD值。(参考波长：650nm)
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结果计算EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
用病人样品的OD值比上参考对照质控的OD值计算检验结果
A病人样品/ A参考对照质控= Q
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IgG抗体：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
Q＜1 | 阴性：没有检测到抗汉滩型汉坦病毒IgG抗体 |
1≤Q≤1.5 | 可疑灰色区域，不能明确说明结果，10天之后应当对疾病的病程进行再次检测。如果疑似病人感染了汉坦病毒，我们建议您对检测的样品也检测下汉滩病毒(Hantaan)IgM抗体或检测下普马拉(Puumala)病毒抗体。 |
Q＞1.5 | 阳性：检测到抗汉滩病毒特异性IgG抗体 |
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IgM抗体：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
Q＜1 | 阴性：没有检测到抗汉滩型汉坦病毒IgM抗体 |
1≤Q≤2 | 可疑灰色区域，不能明确说明结果，10天之后应当对疾病的病程进行再次检测。如果疑似病人感染了汉滩病毒，我们建议您对检测的样品也检测下普马拉病毒(Puumala)抗体。 |
Q＞2 | 阳性：检测到抗汉坦病毒特异性IgM抗体 |
