ELISA抗原竞争法检测样品中sIL-...
实验概要
本法是用纯化或重组的IL-2R(α链，P55，CD25，Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板，同时加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标准品对照，从抗IL-2R McAb与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白结合受抑制程度来求得待测样品中sIL-2R含量。
主要试剂
1. FITC标记的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml)：FITC为异硫氰酸荧光素，这里仅作为半抗原使用，而不作为荧光素标记。
2. 碱性磷酸酶标记的兔抗FITC抗体(酶标抗体)
3. 对硝基苯磷酶盐底物液；用pH9.8的二乙醇胺缓冲液溶解，配成浓度为1mg/ml。
4. 1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS)：为封闭液点稀释液
5. 不同倍比稀释度的sIL-2R标准品：以1% BSA-PBS稀释。
6. 洗涤液(0.05%Tween20-PBS)
主要设备
96孔酶标板(聚苯乙烯板)，酶标仪，波长465nm滤光片，刻度吸管，毛细吸管，加样器(头)，4℃冰箱
实验材料
1. 纯化或重组的IL-2R蛋白(α链，P55，CD25，Tac抗原)(40.000u/ml)
2. 待测sIL-2R样品
实验步骤
1. 以一定浓度的纯化或重组的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶标板，100ul/孔，4℃过夜(16-72h)；
2. 弃包被液，用1%BSA-PBS封闭非特异性结合位点，200ul/孔，置室温2h；
3. 用洗涤液加满各孔置3min，然后倾去，反复洗涤3次；
4. 分别加入不同稀释度的sIL-2R标准品及待测样品，50μl/孔；
5. 各孔均加入FITC标记的IL-2R McAb，50μl/孔，充分混匀后置室温2h；
6. 同上洗涤3次；
7. 各孔均加入碱性磷酶酶标记的兔抗FITC抗体，100μl/孔，置室温1h；
8. 同上洗涤3次；
9. 各孔均加入底物液，100μl/孔，置室温15-30min；
10. 用酶标仪以波长405nm测各孔OD值。
