免疫亲和色谱法 技术的应用
1)免疫萃取(innunoextraction)
IAC 技术最简单的应用就是单纯作为样品的预处理手段,即制备免疫亲和柱,也称为离线(off-line)IAC。现在市场上已有克伦特罗、黄曲霉毒素等多种免疫亲和柱出售,使用效果非常好。
2)IAC 联用技术
IAC 联用技术也可称为在线 IAC。将 IAC 设备与 HPLC、LC/MS、GC/MS、CE 仪器连接,提纯后的样品直接进样检测。与离线模式不同,样品纯化、分析实现自动化,主要通过柱切换技术进行连接。20世纪70年代末,刚性、高效固相支持物的出现使抗体固定技术应用于高效液相色谱,由此产生了高效免疫亲和色谱(HPIAC)。HPIAC 是在线 IAC 的一种应用形式,简化了分析过程并将分离、定性、定量一体化。HPIAC 中大多使用硅胶与玻璃免疫吸附剂,应用于直接分析残留物还不是很普遍,有时免疫亲和柱上的洗脱物峰不是很尖,因为解吸附作用比理论上要慢。
3)多残留免疫亲和色谱(MIAC)
MIAC 更加集中了 IAC 的优势,可在一个色谱过程中提取多个样品。亲和柱上偶联一种抗体提纯几种结构相关的簇特异性抗原,或偶联多种抗体分别提纯多种交叉反应率低的分析物都是常用的方式。MIAC 可用于离线和在线方式。
4)放射荧光检测法
放射荧光检测法也是一种很好的定量方法。Shelver 和 Smith应用 IAC 净化技术处理样品,检测β-兴奋剂莱克多巴胺及其代谢物。他们以单克隆抗体为配基,并结合了放射性亲和色谱作为检测方法。
5)柱后免疫检测
色谱免疫分析法也能检测其他色谱柱的洗脱液,主要是把固定抗体的亲和柱或固定有类似物的亲和柱接于 HPLC 柱的出口,然后进行直接检测或免疫测量分析。例如将 HPLC 柱流出液与含有标记抗体或 Fab 片段的溶液相混合,然后将混合液通过固定有类似物的亲和柱,与抗体或 Fab 片段结合的分析物会流过柱,到达检测器。地高辛、生物素都可用此方法进行检测。
色谱免疫分析法包括竞争结合免疫分析、免疫测量分析、同质免疫分析及酶联免疫亲和色谱等很多种,但这些方法主要应用在医学检测方面。随着农业现代化的推进,兽药、添加剂残留检测也会逐步向这一方向发展,提纯和检测一体化一直是我们的目标。
