亲和色谱法载体的选择
用于亲和色谱法的理想载体应非特异性吸附要尽可能小,对其他大分子物质的作用很微弱;必须具有多孔的网状结构,能使大分子自由通过而增加配基的有效浓度;必须具有相当量的化学基团可供活化,并在温和条件下能与大量的配基连接;具有良好的机械性能;在较宽的pH值、离子强度和变性剂浓度范围内具有化学和机械稳定性;高度亲水,使固相吸附剂易与水溶液中的生物高分子接近。
亲和色谱法常用的载体有纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶及聚乙烯凝胶等。
①纤维素 纤维素是制备固相酶和免疫吸附剂的常用载体。纤维素虽具有价廉和来源充足的优点,但由于它的纤维性和不均一性的缺点,蛋白质大分子难以掺入,非专一性吸附也比较严重,因而用纤维素制备的吸附剂亲和层析倍数不高。
②琼脂糖凝胶 琼脂糖已制成珠状凝胶颗粒,商品名称为 Sepharose,内含2%,4%和6%的琼脂糖的珠状凝胶分别称为 Sepharose2B,4B,6B。凝胶浓度越低,其结构越松散,孔径越大,但机械强度随浓度的降低而减少。
珠状琼脂糖凝胶亲水能力弱,物理和化学性能稳定,在室温条件下用0.1mol/L NaOH或1mol/L HCl 处理2～3h 都不致引起颗粒性质变化,用6mol/L 盐酸胍或7mol/L 尿素长期处理,只引起珠状凝胶略微缩小,而不引起吸附性能的减弱。因此用琼脂糖制成的吸附剂可反复使用。
③聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺凝胶结构稳定。控制单体和交联剂的浓度便可得到不同交联度的产品,珠状聚丙烯酰胺凝胶的商品名为 Bio-gel-P。由于凝胶韧性强,易于过筛做成颗粒,也可做成微球。聚丙烯酰胺凝胶的物理和化学性质稳定,抗微生物侵袭能力比琼脂糖强。它有很多的可供化学反应的酰胺基,使之能制得配基含量高的衍生物,因此特别适用于配基与蛋白质之间亲和力比较弱的系统中。
