单克隆抗体的纯化_抗原-葡聚糖和抗鼠1g-葡聚糖进行纯化
| 实验方法原理 | 当所希望制备的抗体不能与葡萄球菌蛋白A有效地结合时（如IgM和一些IgG1抗体），可以用亲和层析柱来进行制备，柱子装填的介质是偶联上蛋白抗原或者抗鼠Ig的CNBr活化葡聚糖。这种抗原-葡聚糖将用于分离特异性的抗体，而抗鼠 Ig-葡聚糖用于分离所有的鼠免疫球蛋白。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | CNBr 活化葡聚糖 4B (Amersham Pharmac1a B1otech)1 mmol L HCl 偶联缓冲液蛋白质抗原或抗鼠Ig的抗体（可购买获得）1 mol L 乙醇胺 pH 8.0 的 PBS洗涤缓冲液 60 mL或者150 mL的玻璃砂芯漏斗 中等孔径。 |
| 实验步骤 | 1)将3.3 g CNBr活化葡聚糖4B溶胀于1 mmol/L HCl中（可得10 mL溶胀的凝胶）， 然后转移至玻璃砂芯漏斗中，并用：（a) 200-500 mL 的1 mmol/L HCl； (b) 200- 500 mL偶联缓冲液。依次洗涤>30 min。 2)将葡聚糖凝胶转移至 50 mL 锥形塑料离心管中，加 50-100 mg 的配体（2-5 mg/mL), 混匀后置摇动平台 4℃ 过夜。250 g离心 10 min, 弃上清。 3)加偶联缓冲液至满管，离心，弃上清。 4)加 20-40mL 1 mol/L pH 8.0 的乙醇胺，置摇动平台 4℃ 4-5 h, 离心，弃上清。 5)在管中依次加满 PBS 和洗涤缓冲液洗涤，每次洗后离心。 6)将葡聚糖凝胶转移到一个2.5 cm 的玻璃柱中，用 100 mL 的 PBS 平衡。 7)腹水液稀释于 3 倍体积的 PBS 后上柱，流速为 1-5 mL/min，在室温下操作。 用 30 mL的 PBS 从柱子上洗去未结合的蛋白质。 8)用甘氨酸•Cl 缓冲液洗脱结合蛋白质，分析、浓缩 展开 |
推荐
