蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒使用说明
主要用途
YIJI蓝色荧光细胞核染色分析试剂是一种旨在通过使用荧光染料DAPI与细胞核DNA特异性结合，并发出荧光检测信号，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。产品即到即用，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
作为细胞DNA染色剂之一的4,6-二咪基－4-联苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激发波长356nm，使得DAPI成为一种常用的荧光检测信号，并作为双重染色或重叠染色的主要染色剂之一。
产品内容
YIJI清理液（Reagent A） 200毫升
YIJI固定液（Reagent B） 50毫升
YIJI扩张液（Reagent C） 50毫升
YIJI染色液（Reagent D） 20毫升
YIJI抗淬灭剂（Reagent E） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存YIJI固定液（Reagent B）、YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬灭剂（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬灭剂（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作
盖玻片：用于染色后封片
荧光显微镜：用于观察细胞核DNA染色
实验步骤
贴壁细胞染色
准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％
（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项6）
小心抽掉细胞培养液
小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A）
小心抽掉YIJI清理液（Reagent A）
小心沿着孔壁加入500微升－20℃预冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆盖培养孔表面
在4℃冰箱里孵育6分钟
小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
小心沿着孔壁加入500微升YIJI清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
在室温下孵育5分钟
小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），覆盖培养孔表面
在室温下孵育5分钟
小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A），空气中晾干
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）
小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），覆盖培养孔表面
室温下孵育10分钟，避免光照
小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）
悬浮细胞染色
将悬浮细胞（1 X 106细胞）移入到1.5毫升离心管
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉上清液
小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉YIJI清理液（Reagent A）
轻轻指弹，松动细胞颗粒群
一滴一滴加入500微升－20℃预冷的YIJI固定液（Reagent B），混匀细胞颗粒群
在4℃冰箱里孵育6分钟
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
在室温下孵育5分钟
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），混匀细胞颗粒群
在室温下孵育5分钟
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）
小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），混匀细胞颗粒群
室温下孵育10分钟，避免光照
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
小心加入400微升 YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
小心抽掉400微升YIJI清理液（Reagent A）
小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
移出5微升到载玻片上，放上盖玻片
即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）
载玻片染色
准备1个细胞载玻片
小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A）
小心抽掉YIJI清理液（Reagent A）
小心加上100微升－20℃预冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆盖载玻片表面
在4℃冰箱里孵育6分钟
小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面
在室温下孵育5分钟
小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
小心加上100微升YIJI通透液（Reagent C），覆盖载玻片表面
在室温下孵育5分钟
小心抽掉100微升YIJI通透液（Reagent C）
小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面
小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），空气中晾干
重复实验步骤13至14一次
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）
小心加上100微升YIJI染色液（Reagent D），覆盖载玻片表面
室温下孵育10分钟，避免光照
小心抽掉100微升YIJI染色液（Reagent D）
小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面
小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
小心加上50微升 YIJI抗淬灭液（Reagent E）
盖上盖玻片
即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）
注意事项
本产品为100次（4个24孔培养板）和200次（载玻片）操作规格
本产品友好使用于双重染色或重叠染色
YIJI染色液（Reagent D）为半通透性染料
操作时须戴手套
操作时，避免污染母液
本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整试剂溶液：
操作容器 | 试剂溶液规格 |
载玻片 | 100微升 |
载玻片培养皿 | 100微升 |
35mm培养皿 | 500微升 |
96孔培养板 | 50微升 |
48孔培养板 | 100微升 |
24孔培养板 | 200微升 |
12孔培养板 | 400微升 |
6孔培养板 | 500微升 |
25cm2细胞培养瓶 | 1毫升 |
本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色
本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定荧光清晰
